产品货号:
GS0107
中文名称:
磁珠法DNA胶回收试剂盒(96孔)
英文名称:
Mag-BB 96 Well DNA Gel Purification Kit
产品规格:
2×96T|10×96T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是在我司磁珠法胶回收试剂盒的基础上进行改进、一次可同时处理96个样品的试剂盒。该试剂盒适用于从TAE和TBE琼脂糖凝胶中回收100bp~30kb的DNA片段,回收效率可达70%。该试剂盒中的纳米磁珠能够特异性吸附核酸分子,去除其他杂质,得到高质量的DNA回收产物。所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学实验。
- 适用范围广,回收效率高,对于100bp~30kb之间的DNA片段回收效率在70%以上,尤其对于长片段DNA的回收,磁珠法比柱式法的回收效率高出20%左右。
- 操作简单快速,整个回收过程仅须30分钟左右。
- 无需离心,实现DNA回收的高通量化和自动化。
- 一次可同时处理96个不同的样品。
组分 | 2×96T | 10×96T |
Buffer MB2 | 100mL | 500mL |
QuMag Beads | 20mL | 100mL |
Deep Well Collection Plate | 2块 | 10块 |
96 Well Storage Plate | 2块 | 10块 |
TE Buffer(pH8.0) | 10mL | 50mL |
保存:室温。
Buffer MB2中含有刺激性的化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 自备材料:磁分离板、水浴锅、70%乙醇。
- Buffer MB2在低温下可能产生沉淀,使用前请检查,如有沉淀,请于37℃溶解沉淀。请提前将水浴锅调至65℃备用。
- 通过琼脂糖凝胶电泳尽可能将目的DNA片段与其它片段分开,用干净的手术刀片将含目的DNA片段的琼脂糖凝胶块切下,放入Deep Well Collection Plate中。
- 尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。
- 若胶块体积太大,可先将胶块切成小块。
- 切胶过程尽可能快,减少DNA在紫外线中的暴露时间以降低对DNA的损伤。
- 尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。
- 根据胶块的重量,按每100mg琼脂糖胶块(如胶块不足100mg则用水补充至100mg)加入200μL Buffer MB2。
- 将含有胶块的Deep Well Collection Plate置于65℃水浴5~10min,间或混匀,直至胶块完全溶化。
- 胶块完全溶化即可,过长时间的处理可能导致DNA损伤。
- 取出Deep Well Collection Plate,加入100μL QuMag Bead,吸打混匀,室温结合3min,间或混匀。
- 加QuMag Bead solution之前,请充分混匀。
- 将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上1~2min,待QuMag Beads完全吸至孔壁上,吸弃上清,从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate。
- 吸弃上清前,若孔口粘有少量QuMag Beads,请用上清液将其洗至Deep Well Collection Plate内,以确保所有QuMag Beads吸附至孔壁上。
- 吸弃上清时请勿吸入QuMag Beads,尽量吸净上清。
- 从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate后,若有少量上清,请将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上,再次吸取上清。
- 吸弃上清前,若孔口粘有少量QuMag Beads,请用上清液将其洗至Deep Well Collection Plate内,以确保所有QuMag Beads吸附至孔壁上。
- 加入900μL 70%乙醇,吸打混匀,然后将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上1min,待QuMag Beads完全吸至孔壁上,吸弃上清,从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate。
- 重复步骤6一次,55℃恒温箱中干燥5~7min至管内无液体残留。
- 干燥前,请尽量吸净孔内的液体。
- 干燥前,若出现液体挂壁现象,可将Deep Well Collection Plate短暂离心之后,再将其置于磁分离板上,待所有QuMag Beads完全吸至孔壁之后再吸净孔内的液体。
- 干燥前,请尽量吸净孔内的液体。
- 加入50μL TE Buffer (pH8.0),使QuMag Beads充分悬浮在TE buffer中,室温洗脱3~5min,间或混匀。
- 请将孔壁上所有QuMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 根据实验需要可将TE Buffer用无菌的双蒸水(pH>7.5)代替。
- 请将孔壁上所有QuMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上1min,待QuMag Beads完全吸至孔壁上,小心吸取上清至96 Well Storage Plate,即获得纯化的目的DNA。
- 吸取上清前,请确保QuMag Beads完全吸至孔壁,请勿吸入QuMag Beads,否则影响产物纯度。
- DNA回收效率较低或者未回收到目的片段
- 胶块溶解不完全。可适当延长水浴时间,并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。
- 胶块体积太大,溶胶困难。可先将胶块切碎,再水浴溶胶。
- 结合不充分。加入QuMag Beads之后,请将其充分混匀,并使QuMag Beads处于悬浮状态。
- 操作过程中丢失QuMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的QuMag Beads粘在孔口上,吸弃上清前请用少量的上清液清洗孔口,使粘在孔口的QuMag Beads也吸附在孔壁上。
- 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响,如果使用水进行洗脱,请确保其pH值> 7.5,pH值过低可能导致低洗脱效率。
- 洗脱过程操作不当。洗脱时请将孔壁上所有QuMag Beads完全悬浮在TE Buffer中。
- 洗脱时间较短。加入TE Buffer之后请将QuMag Beads充分悬浮在TE buffer中,洗脱时间3~5min,每隔1min吸打混匀一次。
- 胶块溶解不完全。可适当延长水浴时间,并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。
- 回收DNA进行后续酶切反应效率低
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate,放置2min之后再将其置于磁分离板上1min,吸净管底的液体。若出现残液挂壁现象,请短暂离心之后将其置于磁分离板上1min,吸净孔内的液体。
- QuMag Beads洗涤不充分。向孔中加入70%乙醇之后,请充分混匀,使QuMag Beads充分悬浮在洗涤液中。
- QuMag Beads没有完全干燥。请将QuMag Beads完全干燥,保证无乙醇残留。
- 最后一步吸取上清时吸入QuMag Beads。请确保所有QuMag Beads吸至孔壁上,再吸取上清。如果不小心吸入QuMag Beads,请将上清液放回原孔,待QuMag Beads完全吸至孔壁之后重新吸取上清。或者将吸取的上清DNA溶液10000rpm离心2min,再取上清。
- 琼脂糖质量差。请选用高质量的琼脂糖。
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate,放置2min之后再将其置于磁分离板上1min,吸净管底的液体。若出现残液挂壁现象,请短暂离心之后将其置于磁分离板上1min,吸净孔内的液体。
- 琼脂糖凝胶胶块不溶
- 琼脂糖质量差。请选用高质量的琼脂糖。
- 含目的片段的胶块在空气中放置时间过长,使胶块失水、干燥。建议切胶后立即进行胶回收,或将胶块保存在4℃或-20℃备用。
- 配制琼脂糖凝胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。应重新配制缓冲液。
- 琼脂糖质量差。请选用高质量的琼脂糖。
- 洗脱液的选择
- 洗脱液可以根据后续实验的需要来确定。一般情况下,若需要进行测序反应,请用双蒸水洗脱。如果需要长期保存DNA,请用TE Buffer洗脱。
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