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本试剂盒是通用型的微量生物样本基因组DNA提取试剂盒，适用于从微量动物组织，抗凝血液，凝固血块，血斑及毛囊等各种微量生物样本中抽提基因组DNA。与市售的微量样本基因组抽提试剂盒相比，本试剂盒特点是MagicMag Beads替代硅胶膜吸附柱，MagicMag Beads能够特异性吸附微量生物样本裂解液中的基因组DNA，具有吸附效率高，吸附速度快等优势。另外。本试剂盒整个操作过程无需离心，与核酸自动提取仪相结合，可以实现微量样本基因组DNA提取的自动化和高通量化。采用本试剂盒所得到的基因组DNA质量高，可直接用于酶切、PCR及文库构建等后续实验。

• 通用型的微量样本基因组DNA提取试剂盒，适用于各种微量的生物样本。
  
• MagicMag beads代替硅胶膜吸附柱，吸附效率高，吸附速度快。
  
• 与传统柱式法同类产物相比，获得基因组DNA产量高。
  
• 操作简单快速，整个抽提过程40min左右完成。
  
• 微量体积洗脱，提高基因组DNA的浓度，便于下游实验。
  
• 无需离心，实现微量生物样本基因组DNA提取的高通量化和自动化。

• 样品处理
  
  • 动物组织：取1～5mg的动物组织至1.5mL离心管中，尽量将其切碎，以提高裂解效率。向1.5mL离心管中加入380μL的Buffer MGL和20μL的Proteinase K。
    
    • 对于动物组织如肝脏，肾脏和胰脏，若需要无RNA的基因组DNA，需加入20μL RNase A (10mg/mL)。
  • 抗凝血液、血斑和凝固血块：取10～50μL抗凝血液、2～3片3×3mm血斑或5～10mg的凝固血块样品至1.5mL离心管中。向1.5mL离心管中加入280μL的BufferMGL和20μL的Proteinase K。
    
  • 漱口水：在50mL无菌离心管中加入10mL的漱口水样本，2000rpm离心5min，将上清小心倒掉或用移液器小心吸除上清液。向细胞沉淀中加入380μL Buffer MGL和20μL Proteinase K，然后将其转移至1.5mL离心管中。
    
    • 2000rpm离心5min可收集口腔脱落的细胞，如需收集口腔细菌，请增大离心转速至8000rpm。
  • 3根含毛囊的毛发：从毛发根部毛囊处取1cm长的一段。向1.5mL离心管中加入380μL Buffer MGL和20μL Proteinase K，将1cm长的一段含毛囊的毛发加入到上述离心管中。
• 将上述含有微量生物样本、Buffer MGL和Proteinase K的1.5mL离心管振荡混匀，65℃水浴20min，间或混匀，使样品充分裂解。
  
  • 微量动物组织需要尽量切碎使其充分裂解，65℃水浴20min之后应无肉眼可见的小块，若仍有组织小块，可将其10000rpm离心5min，然后取上清进行后续步骤。
• 向充分裂解的样品中加入Buffer MA和MagicMag Beads
  
  • 向抗凝血液、血斑和凝固血块的裂解液中加入300μL Buffer MA和10μL MagicMag Beads，振荡混匀10s。
    
  • 向动物组织、漱口水和毛囊的裂解液中加入400μL Buffer MA和10μL MagicMag Beads，振荡混匀10s。
    
    • 加MagicMag Beads之前，请将MagicMag Beads充分混匀。
      
    • 请务必将MagicMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留MagicMag Beads吸打干净。
• 将离心管置于磁力架上2min，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 对于抗凝血液、血斑及凝固血块样品，向上述离心管中加入700μL Buffer MLW，振荡混匀10 s。然后将离心管置于磁力架上1min，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。其余的生物样本直接进行第6步。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
• 加入700μL 70%乙醇，振荡混匀10s，将离心管置于磁力架上1min，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤6一次，室温开盖干燥15min或者55℃恒温箱中开盖干燥5min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有MagicMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内的液体。
• 加入15～25μL TE Buffer (pH8.0),65℃水浴5～10min，间或混匀。
  
  • 若生物样本为动物组织、漱口水以及25～50μL抗凝血样，请加入20～25μL TE Buffer;若生物样本为毛囊、血斑、血块和10～25μL抗凝血样，请加入15～20μL TE Buffer。
    
  • 水浴之后可将离心管短暂离心，然后再进行笫9步。
    
  • 请将管壁上所有MagicMag Beads完全悬浮在TE Buffer中。
• 取出离心管并置于磁力架上1min，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。
  
  • 吸取上清前，请确保MagicMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入MagicMag Beads，否则影响产物纯度。
    
  • 若洗脱步骤采用水浴，可以短暂离心之后再取上清。

• 得率低
  
  • 取血样前没有充分混匀。取血样前请将样品充分混匀，使白细胞充分混匀。
    
  • 样品裂解不充分。对于动物组织，请尽量将样品切碎；对于所有样品水浴裂解过程中，间或混匀，利于样品充分裂解；适当延长裂解时间，但裂解时间不超过25min。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MA和MagicMag Beads之后，请将其充分混匀，并使MagicMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失MagicMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的MagicMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的MagicMag Beads也吸附在管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值>7.5,pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5～10min，常温条件下MagicMag Beads只能释放少量的基因组DNA,65℃条件下MagicMag Beads与基因组DNA的作用力减弱，磁珠释放出大量的基因组DNA。
• 获得的DNA条带弥散
  
  • 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的血样及动物组织样品。
    
  • 裂解时间过长。裂解时间请不要超过25min。
• 获得的DNA断裂、降解
  
  • 样品没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜样品。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的血样及动物组织样品，应分装后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验。
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置1min之后再将离心管置于磁力架上30s，吸净管底的液体。若出现残液有不同程度的挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30s，吸净离心管管底的液体。
    
  • 对于血样、血斑及血块样品，请务必采用Buffer MLW洗涤MagicMag Beads-DNA复合物，Buffer MLW能够将残留在磁珠上的血红素等杂质洗脱下来，使得获得的DNA溶液澄清无血红素等杂质污染。
    
  • 对于动物组织，若动物组织未能切碎，裂解之后右眼能够看到组织小块，请10000rpm离心5min，然后取上清再进行后续步骤。
    
  • MagicMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使MagicMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
    
  • MagicMag Beads没有完全干燥。请将MagicMagBeads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入MagicMagBeads。请确保所有MagicMag Beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入MagicMagBeads，请将上清液放回原管，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的上清DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
• 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
  
  • 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
    
  • 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
    
  • 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。