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本试剂盒是专用于微量PCR产物的纯化，可以纯化总量低至25ng的PCR产物，纯化片段广，可以纯化100bp～50kb的DNA片段，回收效率可达85%以上，回收效率受片段大小的影响比较小。与市售的微量PCR产物纯化试剂盒相比，本试剂盒特点是用QuMag Beads代替硅胶膜吸附柱，QuMag Beads能够特异性吸附微量的DNA，具有吸附效率高，吸附速度快等优势。本试剂盒能有效的除去蛋白质，dNTP，引物等杂质，无需离心，适用于自动化核酸纯化平台，纯化后的DNA可以应用到各类下游分子生物学实验。

• 适用微量PCR产物的纯化，可以纯化低至25ng PCR产物。
  
• QuMag beads代替硅胶膜吸附柱，吸附效率高，吸附速度快。
  
• 适用范围广，回收效率高，对于100bp～50kb之间的DNA片段回收效率在85%以上。
  
• 操作简单，快速。
  
• 无需离心，可以实现核酸纯化高通量化和自动化。

• 自备材料：磁力架、1.5mL离心管和70%乙醇。
  
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  Buffer MB2在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

• 将PCR反应液或酶促反应液移至无菌的1.5mL离心管中，若PCR反应液或酶促反应液的体积小于50μL，请用TE Buffer将其补足至50μL。
  
• 向50μL PCR产物反应液或者酶促反应液中加入150μL Buffer MB2，然后加入75μL QuMag Beads，吸打或者点振混匀，室温静置3min，间或混匀。
  
  • 向离心管中加QuMag Beads之前，请将QuMag Beads充分混匀。
    
  • 请务必将QuMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留QuMag Beads吸打干净。
• 将离心管置于磁力架上1min，待QuMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量QuMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有QuMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入QuMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 加入700μL 70%乙醇，吸打或者点振混匀，将离心管置于磁力架上1min，待QuMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，然后从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量QuMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有QuMag Beads吸至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入QuMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤4一次，室温开盖干燥15min或者55℃恒温箱中开盖干燥5min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有QuMag Beads完全吸至管壁之后再吸净离心管内的液体。
• 加入15μL的TE Buffer (pH8.0)，室温放置5min，间或混匀。
  
  • 请将离心管壁上所有QuMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 根据实验需要可以将TE Buffer用无菌的双蒸水(pH>7.5)代替。
• 取出离心管并置于磁力架上1min，待QuMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得纯化的DNA。
  
  • 吸取上清前，请确保QuMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入QuMag Beads，否则影响产物纯度，从而影响后续实验。

• PCR产物回收效率较低或者未回收到目的片段
  
  • PCR产物浓度过低。纯化前请通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的浓度。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MB2和QuMag Beads之后，请将其充分混匀，并使QuMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失QuMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的QuMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的QuMag Beads也吸附在管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH>7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有QuMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 洗脱时间太短。加入TE Buffer之后请充分悬浮QuMag Beads之后，室温放置3min，间或混匀。
• 回收的PCR产物进行后续酶切或者连接效率低
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置1min之后再将离心管置于磁力架上30s，吸净管底的液体。若出现残液挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30s，吸净离心管内的液体。
    
  • QuMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使QuMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
    
  • QuMag Beads没有完全干燥。请将QuMag Beads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入QuMag Beads。请确保所有QuMag Beads吸至管壁上，再吸取上清。如果不小心吸入QuMag Beads，请将上清液放回原管，待QuMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的上清DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
    
  • 回收后的PCR产物在反复冻溶的情况下，会加速末端A和整个PCR产物的断裂，从而造成与T载体连接或直接酶切效率的下降。建议回收后立即进行酶切或连接实验。
    
  • 选择合适的PCR产物和T载体的摩尔比，有助于提高连接效率。
    
  • 请确保PCR最后72℃ 5～10min的延伸时间，这样才有足够的PCR产物在末段带有A附加碱基，保证较高的连接效率。