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本试剂盒采用Buffer MPCB裂解植物样品，释放出植物基因组DNA，蛋白质、多糖和细胞碎片等杂质通过离心沉淀下来。将上清液转移到新的离心管中，在结合液的作用下MagicMag Beads选择性的吸附上清液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去MagicMag Beads吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下MagicMag Beads释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。采用本制品提取植物基因组无需苯酚、氯仿抽提，从50mg植物组织中可以获得15μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。

• 自备材料：磁力架、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、水浴锅、1.5mL离心管、无水乙醇、70%乙醇、RNase A溶液（10mg/mL）和β-巯基乙醇。
  
• 每次使用前请检查Buffer MPCB是否出现沉淀，如有沉淀，请于65℃溶解之后使用。

• 将25～100mg的新鲜植物组织在液氮中充分研磨成粉末，并迅速转移至1.5mL的离心管中。
  
  • 研磨是否充分，将直接影响基因组DNA的得率。研磨标准是在加入Buffer MPCB之后，溶液中没有大的组织团块。
    
  • 对于含水量较多的样品，请尽量在研磨和裂解前挤干去除水分。
• 加入600μL Buffer MPCB、12μL β-巯基乙醇和20μL Proteinase K溶液，震荡混匀，65℃水浴30～60min，间或混匀。
  
  • 如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL的RNase A (10mg/mL)，混匀后室温放置5min。
• 12000rpm离心5～10min，小心吸取500μL上清液至新的1.5mL离心管中。
  
• 向上清液中加入500μL Buffer MPL和15μL MagicMag Beads，吸打混匀，室温静置1min。
  
  • 向离心管中加MagicMag Beads之前，请将其充分混匀。
    
  • 请务必将MagicMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留MagicMag Beads吸打干净。
    
  • 处理多个样品时，可先将Buffer MPL与MagicMag Beads按100：3的体积比混匀，然后向每管上清液中加入515μL上述混合液，加入的过程当中请间或混匀，确保磁珠呈悬浮状态。
• 将离心管置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• （可选步骤）向离心管中加入500μL Buffer MPW，吸打混匀，将离心管置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 对于常规植物，请直接进行第7步；对于多糖和多酚类植物请进行此步骤之后再进行第7步。
    
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 向离心管中加入900μL 70%乙醇，吸打混匀，将离心管置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤7一次，室温开盖干燥15～20min或者55℃恒温箱开盖干燥5～7min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有MagicMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。
• 加入100μL TE Buffer (pH8.0)，65℃水浴5～10min，间或混匀。
  
  • 请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 根据实验需要可以将TE Buffer（pH8.0）用无菌的双蒸水（pH>7.5）代替。
• 取出离心管并置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，吸取上清至新无菌的离心管，即获得基因组DNA。
  
  • 吸取上清前，请确保MagicMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入MagicMag Beads，否则影响基因组DNA的纯度。

• 得率低
  
  • 样品研磨不充分。请将样品研磨成粉末。
    
  • 样品裂解不充分。请适当延长裂解时间。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MPL和MagicMag Beads之后，请将其充分混匀，并使MagicMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失MagicMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的MagicMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的MagicMag Beads也吸附至管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有MagicMag Beads溶解在TE Buffer中。
    
  • 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5～10min，常温条件下MagicMag Beads只能释放少量的基因组DNA，65℃条件下MagicMag Beads与基因组DNA的作用力减弱，MagicMag Beads释放出大量的基因组DNA。
    
  • 取样量太多或者太少。请严格按照说明书操作。
• 获得的DNA溶液有颜色
  
  • 取样量过多。严格按照说明书操作，如果需要增加样本量，可以等比例增加Buffer MPCB、β-巯基乙醇、Proteinase K和MagicMag Beads的用量，其余溶液的量可以不变。
    
  • 裂解不充分。请将组织充分研磨，适当增加Buffer MPCB用量以及适当延长裂解时间。
    
  • 洗涤不充分。如果加入MagicMag Beads和Buffer MPL之后，混匀过程中MagicMag Beads成团状、丝状或者颗粒状，请增加吸打或者点振次数。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入MagicMag Beads。请确保所有MagicMag Beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入MagicMag Beads，请将上清液放回原管，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
• 获得的DNA条带弥散
  
  • 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的样品。
    
  • 裂解时间过长。裂解时间不要超过90min。
    
  • 研磨工具没有预冷。研磨样品前请用液氮充分预冷研钵和研钵棒。
• 获得的DNA断裂、降解
  
  • 样品没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜样品用液氮进行研磨，样品如果因为某些原因必须先行保存，可以将样品保存于-70℃冰箱。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的样品应分割后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 样品研磨不充分。液氮研磨样品时，应注意研磨充分，加入裂解液后充分混匀。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验反应
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。若出现残液的挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管内的液体。
    
  • MagicMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使MagicMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
    
  • MagicMag Beads没有完全干燥。请将MagicMag Beads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入MagicMag Beads。请确保所有MagicMag Beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入MagicMag Beads，请将上清液放回原管，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
• 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
  
  • 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
    
  • 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
    
  • 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。