产品目录

本试剂盒一种从唾液尿液细胞和细菌中抽提基因组DNA的试剂盒。本制品采用Buffer CL裂解上皮细胞和细菌细胞，释放出基因组DNA，在结合液的作用下特殊吸附膜选择性的吸附释放的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去吸附膜吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下吸附膜释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。采用本制品提取上皮细胞和细菌细胞的基因组DNA无需苯酚、氯仿等有毒试剂。获得DNA的OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。

• 自备材料：水浴锅、1.5mL离心管、无水乙醇和RNase A溶液（10mg/mL）。
  
• 每次使用前请检查Buffer CL是否出现沉淀，如有沉淀，请于65℃溶解使用。
  
• 试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀，在瓶身做好标记。于室温密封保存（15mL Wash Solution加入45mL无水乙醇；30mL Wash Solution加入90mL无水乙醇）。

• 取样：
  
  • 量取250μL的唾液至1.5mL离心管中。
    
  • 尿液：量取5～10mL新鲜的尿液，10000rpm离心2min，弃上清；然后向细胞沉淀中加入500μL PBS，充分悬浮细胞，10000rpm离心2min，弃上清。
  • 为确保样本不被食物或者饮品污染，一般漱口后15min采集唾液。
    
  • 量取的唾液用量可以适当调整，一般在200～300μL之间比较理想。
    
  • 尿液的取量可以根据实验要求适当调整，一般在5～10mL都可以获得比较理想的基因组DNA。
• 向离心管中加入350μL Buffer CL和20μL Proteinase K，震荡混匀，65℃水浴20min，间或混匀。
  
  • 如果需要无RNA的基因组DNA，可以向离心管中加入20μL 10mg/mL RNase A solution。
• 向离心管中加入300μL无水乙醇，充分混匀，然后将全部溶液和沉淀物转移至硅胶膜吸附柱内（吸附柱放入收集管中），10000rpm离心1min，倒掉收集管中溶液，将吸附柱放回收集管中。
  
  • 吸附柱的最大容量为750μL，需要过两次吸附柱；如果后续实验需要基因组DNA浓度不是很高，可以只过一次吸附柱。
• 向吸附柱中加入500μL Wash Solution，10000rpm离心1min，倒掉收集管中溶液，将吸附柱放回收集管中。
  
  • Wash Solution使用前请检查溶液是否按比例加入无水乙醇。
• 重复步骤4一次。
  
• 将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2min。
  
  • 此步决不能省略，否则残留的乙醇会严重影响后续实验。
• 取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入50μL TE Buffer，静置3min，12000rpm离心2min，得到DNA溶液置于-20℃保存或者直接用于后续实验。
  
  • 如果想提高DNA的得率，可重复步骤7或将TE buffer 60℃预热。

• 得率低
  
  • 唾液或者尿液不新鲜或者唾液保存不当导致细胞破裂DNA降解；请采用新鲜的唾液或者尿液，需要保存时请采用适当
    的保存液。
    
  • 尿液需要离心获得尿液中细胞，吸弃上清时请勿吸到细胞沉淀。
    
  • Wash Solution未加入无水乙醇或者无水乙醇的加量不正确，请严格按照Wash Solution瓶身上的标记加入正确的无水
    乙醇。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能
    导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。请将洗脱液加入到吸附膜的中央位置。
• 获得的DNA条带弥散
  
  • 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的样品。
    
  • 裂解时间过长。裂解时间不要超过30min。
• 获得的DNA断裂、降解
  
  • 样品没有按照要求保存。请使用新鲜样品，样品如果因为某些原因必须先行保存，可以将样品保存于-70℃冰箱。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的样品应分割后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验反应
  
  • 乙醇有残留。请完成第二次洗涤之后，将吸附柱12000rpm 2min空转，开盖室温干燥几分钟之后再进行洗脱。
• 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
  
  • 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
    
  • 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
    
  • 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。