产品货号:
GS0070
中文名称:
柱式植物基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
SD-10 Spin Column Plant Genomic DNA Purification Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒通过Buffer PCB裂解植物样品,释放出基因组DNA,然后采用特殊的吸附膜,能够有选择性地吸附核酸分子,去除其他杂质,得到高质量的基因组DNA。使用本试剂盒从100mg植物组织中可以获得3~10μg DNA,OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、Southern blot等相关实验。
组分 | 50次 | 100次 |
Buffer PCB | 40mL | 80mL |
Buffer BD | 30mL | 60mL |
PW Solution | 18mL | 36mL |
Wash Solution | 7.5mL | 15mL |
TE Buffer (pH8.0) | 10mL | 20mL |
吸附柱及收集管 | 50套 | 100套 |
保存:室温,4℃可保存时间更长。
Buffer PCB中含有刺激性化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 自备材料:水浴锅、小型高速离心机(最大离心力≥ 12000×g)、1.5mL离心管、无水乙醇、异丙醇、RNase A溶液(10mg/mL)、β-巯基乙醇、氯仿等。
- 试剂盒初次开启,按瓶身标签说明在PW Solution中加入相应量的异丙醇混匀、Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀,在瓶身做好标记。于室温密封保存(18mL PW Solution加入12mL异丙醇,7.5mL Wash Solution加入22.5mL无水乙醇;36mL PW Solution加入24mL异丙醇,15mL Wash Solution加入45mL无水乙醇)。
- 每次使用前请检查Buffer PCB是否出现沉淀,如有沉淀,请于65℃溶解后使用。
- 提前将水浴锅调至65℃备用。
- 将50~100mg的新鲜植物组织在液氮中充分研磨成粉末,并转移至1.5mL的离心管中。
- 研磨是否充分,将会影响基因组DNA的得率。磨碎标准是在加入Buffer PCB后,在溶液中没有大的组织团块。
- 样品尽量不要采用植物的微管组织。
- 对于含水量较多的样品,请尽量在研磨和裂解前挤干去除水分。
- 研磨是否充分,将会影响基因组DNA的得率。磨碎标准是在加入Buffer PCB后,在溶液中没有大的组织团块。
- 加入600μL 65℃预热的Buffer PCB和12μL β-巯基乙醇。震荡混匀,置于65℃水浴25min,间或混匀。
- 如需得到无RNA的DNA,可在水浴后加入20μL的RNase A(10mg/mL),室温放置2~5min。
- 加入600μL的氯仿,充分混匀,12000rpm离心5min。吸取上层水相至一个干净的1.5mL的离心管中。
- 含有多酚或多糖的植物组织,可以在进行第4步前用等体积酚:氯仿(1:1,pH8.0)反复混匀,12000rpm离心5min,取上清,反复抽提1~3次。
- 不要吸取到中间层变性蛋白质部分。
- 含有多酚或多糖的植物组织,可以在进行第4步前用等体积酚:氯仿(1:1,pH8.0)反复混匀,12000rpm离心5min,取上清,反复抽提1~3次。
- 加入与上层水相等体积Buffer BD,颠倒混匀3~5次,再加与上层水相等体积的无水乙醇,充分混匀后用移液器将其全部加入到吸附柱中,室温静置2min。10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- 将吸附柱放回收集管中,加入500μL PW Solution,10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- PW Solution使用前请检查溶液是否按比例加入异丙醇。
- 将吸附柱放回收集管中,加入500μL Wash Solution,10000rpm,离心1min,倒掉收集管中废液。
- Wash Solution使用前请检查溶液是否按比例加入无水乙醇。
- 将吸附柱放回收集管中,12000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略,否则残留的乙醇会严重影响后续实验。
- 取出吸附柱,放入一个新的1.5mL离心管中,在吸附膜中央加入50μL TE Buffer,静置3min,12000rpm离心2min,得到的DNA溶液置于-20℃保存或直接用于后续试验。
- 如果想提高DNA的得率,可重复步骤8或将TE Buffer 60℃预热。
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