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本制品对经典的SDS裂解液进行了改良，并使用高浓度的蛋白变性剂，大大提高了裂解的效率，缩短了裂解的时间。无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。从2mL酵母菌液可以获得5～10μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。

• 该试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置4℃保存。
  
• Buffer Digestion中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

• 自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、1.5mL离心管、无水乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇、RNase A (10mg/mL)等。
  
• 试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在PW Solution中加入相应量的异丙醇混匀、Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀，在瓶身做好标记，于室温密封保存（18mL PW Solution应加入12mL异丙醇，7.5mL Wash Solution应加入22.5mL无水乙醇；36mL PW Solution应加入24mL异丙醇，15mL Wash Solution应加入45mL无水乙醇）。
  
• Snailase比较难溶解，请提前将Snailase加入Snailase Storage Buffer，涡旋混匀使酶溶解，如溶解不完全，可以将Snailase置于冰箱4℃过夜溶解。待完全溶解后分装，-20℃冰箱保存备用。
  
• 每次使用前请检查Buffer Digestion是否出现沉淀，如有沉淀，请于56℃溶解沉淀后使用。

• 取1～2mL过夜培养的酵母菌液，加入1.5mL离心管中，室温10000rpm离心1min，弃上清，收集菌体。
  
  • 1mL过夜培养的酵母培养物离心收集，湿重约为20mg。
• 酵母细胞壁的去除：按每20mg菌体湿重取600μL Snailase Reaction Buffer加入步骤1中的离心管，同时加入2.4μL β巯基乙醇和50μL实验前准备好的Snailase，37℃水浴3h。室温10000rpm离心2min，弃上清。
  
  • 酵母细胞壁结构坚韧，若想破壁完全，可以增加Snailase的用量或延长破壁时间，可以37℃水浴过夜。
• 加入200μL Buffer Digestion，再加入20μL Proteinase K溶液，震荡混匀。56℃水浴1h至细胞完全裂解。
  
  • 水浴过程中，每10min颠倒混匀一次，可促进样品裂解。
    
  • 如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL的RNase A（10mg/mL），室温放置2～5min。
• 加入100μL Buffer PY，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
  
• 室温10000rpm离心5min，将上清转移到新的1.5mL离心管中。
  
• 加入200μL Buffer BD，充分颠倒混匀。
  
  • 加入Buffer BD后，如有沉淀产生，可70℃水浴10min。
• 加入200μL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
  
  • 加入无水乙醇后可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响DNA的提取和应用。
• 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm室温离心1min，倒掉收集管中废液。
  
• 将吸附柱放入收集管中，加入500μL PW Solution，10000rpm离心30 s，倒掉收集管中废液。
  
  • 使用前注意溶液中是否按比例加入异丙醇。
• 将吸附柱放入收集管中，加入500μL Wash Solution，10000rpm离心30 s，倒掉收集管中废液。
  
  • 使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。
• 将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
  
  • 将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的Wash Solution，Wash Solution的残留会影响基因组DNA的产量和后续的实验。
• 取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50μL TE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
  
  • 如果想提高DNA的得率，可重复步骤12。