产品货号:
GS0067
中文名称:
柱式细菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
Czup Column Bacteria gDNA Purification Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒对经典的SDS裂解液进行了改良,并使用高浓度的蛋白变性剂,大大提高了裂解的效率,缩短了裂解的时间。无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。从1mL过夜培养的细菌菌液可以获得10~20μg DNA,OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
组分 | 50次 | 100次 |
Buffer Digestion | 10mL | 20mL |
Buffer BD | 12mL | 24mL |
PW Solution (concentrate) | 18mL | 36mL |
Wash Solution (concentrate) | 7.5mL | 15mL |
CE Buffer (pH9.0) | 15mL | 30mL |
Proteinase K | 1.2mL | 2.4mL |
Enzymatic lysis buffer | 10mL | 20mL |
吸附柱及收集管 | 50套 | 100套 |
保存:室温
水浴锅、小型高速离心机(最大离心力≥ 12000×g)、1.5mL离心管、无水乙醇、异丙醇、RNase A溶液(10mg/mL)、溶菌酶(阳性菌)等。
- 本试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方,方便使用,而且非常稳定,可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响,如需进一步延长保存期限,请置4℃保存。
- Buffer Digestion中含有刺激性的化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 本剂盒初次开启,按瓶身标签说明在PW Solution中加入相应量的异丙醇混匀、Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀,在瓶身做好标记。于室温密封保存。(18mL PW Solution中加入12mL异丙醇,7.5mL Wash Solution中加入22.5mL无水乙醇;36mL PW Solution中加入24mL异丙醇,15mL Wash Solution中加入45mL无水乙醇。)
- 每次使用前请检查Buffer Digestion是否出现沉淀,如有沉淀,请于56℃溶解后使用。
- 样品处理
- 革兰氏阴性细菌:取0.5~1mL过夜培养的细菌菌液,加入1.5mL离心管中,室温8000rpm离心1min,弃上清,收集菌体。加入180μL Buffer Digestion,再加入20μL Proteinase K溶液,震荡混匀。56℃水浴1h至细胞完全裂解。
注:建议菌液使用量,当OD600值≥3时,菌液使用500μL即可;当OD600值<3时,菌液使用0.5~1mL。 - 革兰氏阳性细菌:取0.5~1mL过夜培养的细菌菌液,加入1.5mL离心管中,室温8000rpm离心1min,弃上清,收集菌体。加入100μL Buffer Digestion和80μL溶菌酶溶液(使用前将相应的溶菌酶加入到Enzymatic lysis buffer中,配置成20mg/mL的溶菌酶溶液)重悬菌液,37℃水浴30min。
注:
① 处理芽孢杆菌,双歧杆菌,微球菌,红球菌,链霉菌等时,采用100μL Buffer Digestion和80μL溶菌酶溶液重悬菌液,37℃水浴30min;处理乳酸菌时,建议采用180μL溶菌酶溶液重悬菌液,37℃水浴30min;处理葡萄球菌时,建议采用100μL Buffer Digestion和80μL溶菌酶,再加入2μL溶葡球菌酶溶液(2mg/mL)重悬菌液,37℃水浴30min。
② 水浴过程中,每10min颠倒混匀一次,可促进样品裂解。
加入20μL Proteinase K溶液,震荡混匀。56℃水浴30min至细胞完全裂解。
注:如需得到无RNA的DNA,可在水浴后加入20μL的RNase A(10mg/mL),室温放置2~5min。
- 革兰氏阴性细菌:取0.5~1mL过夜培养的细菌菌液,加入1.5mL离心管中,室温8000rpm离心1min,弃上清,收集菌体。加入180μL Buffer Digestion,再加入20μL Proteinase K溶液,震荡混匀。56℃水浴1h至细胞完全裂解。
- 加入200μL Buffer BD,充分颠倒混匀,70℃水浴10min。
注:加入Buffer BD后可能会产生白色沉淀,一般70℃水浴后会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 - 加入200μL的无水乙醇,充分颠倒混匀。
注:加入无水乙醇后可能会产生半透明纤维状悬浮物,不影响DNA的提取和应用。 - 将吸附柱放入收集管中,用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中,静置2min,再12000rpm室温离心1min,倒掉收集管中的废液。
- 将吸附柱放回收集管,加入500μL PW Solution,10000rpm离心30 s倒掉滤液。
注:使用前注意溶液中是否按比例加入异丙醇。 - 将吸附柱放回收集管,加入500μL Wash Solution,10000rpm离心30 s倒掉滤液。
注:使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。 - 将吸附柱重新放回收集管中,于12000rpm室温离心2min,离去残留的Wash Solution。
注:将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残留的Wash Solution,Wash Solution的残留会影响基因组DNA的产量和后续的实验。 - 取出吸附柱,放入一个新的1.5mL离心管中,加入50~100μL CE Buffer静置3min,12000rpm室温离心2min,收集DNA溶液。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
注:如果想提高DNA的得率,可重复步骤8。
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