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本制品对经典血液基因组DNA提取方法进行了改良，使用高浓度的蛋白变性剂，当血液体积≤200μL时，无需红细胞裂解，简化了操作流程，大大缩短了裂解的时间。从200μL含无核红细胞的血液样品可以获得1～3μg DNA。

处理大量血液样品时(>200μL)，需先用红细胞裂解液(Buffer TBP)处理，可一次获得大量血液基因组DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。

• 该试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置4℃保存。
  
• Buffer DL、Buffer TBP中含有刺激性化合物，操作过程中应避免直接接触，如沾染皮肤或眼睛请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

• 自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、1.5mL离心管、无水乙醇、RNase A (10mg/mL)等。
  
• 试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记，于室温密封保存（24mL Wash Solution中加入96mL无水乙醇）。
  
• 每次使用前请检查Buffer DL是否出现沉淀，如有沉淀，请于56℃溶解沉淀后使用。

• 样品处理
  
  • 含无核红细胞的血液样品（如人血液）：血液用量≤200μL时，取无核红细胞的血液样品加入到1.5mL离心管中，再加入PBS Solution使总体积为200μL，混匀。
    
    • 血液用ACD（0.48% Citric Acid，1.23% Sodium Citrate，1.47% Glucose）或EDTA（pH8.0）抗凝。
      
    • 血液用量>200μL时，加入2倍体积的Buffer TBP，充分混匀，室温放置1min，直至红血球完全裂解。8000rpm，离心1min，弃上清。用500μL TE Buffer重悬沉淀，8000rpm，离心1min，弃上清，可再用TE Buffer洗涤一次至沉淀为白色，再加入200μL PBS solution，继续步骤2。
  • 含有核红细胞的血液（如家禽血液）：取5～10μL含有核红细胞的血液加入到1.5mL离心管中，再加入PBS Solution使总体积为200μL，混匀。
    
  • 凝固血块：取0.1g凝固血块，用液氮充分研磨，再加入200μL PBS Solution，混匀。
• 加入20μL Proteinase K，混匀。再加入200μL Buffer DL，震荡混匀，56℃水浴10min。
  
  • 混合液变澄清透明为裂解完全。如溶液未变澄清，说明细胞裂解不彻底，应适当延长水浴时间，否则将可能降低DNA的得率或导致提取的DNA不纯。
    
  • 如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL的RNase A（10mg/mL），室温放置2～5min。
    
  • 血液样品超过500μL时，可适当增加Proteinase K和裂解液的用量并延长水浴时间。
• 向上述离心管中加入200μL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
  
  • 加入无水乙醇后可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响DNA的提取和应用。
• 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm室温离心1min，倒掉收集管中废液。
  
• 将吸附柱放回收集管中，向吸附柱中加入500μL GW Solution，10000rpm离心30 s倒掉废液。
  
• 将吸附柱放回收集管中，向吸附柱中加入700μL Wash Solution，10000rpm离心30 s倒掉废液。
  
  • 使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。
• 重复步骤6一次。
  
• 将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
  
  • 将吸附柱盖子打开于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的Wash Solution，Wash Solution的残留会影响基因组DNA的产量和后续的实验。
• 取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50μL CE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
  
  • 如果想提高DNA的得率，可重复步骤9或将CE Buffer 60℃预热。