产品货号:
GS0044
中文名称:
柱式真菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
SPIN-10 Column Fungal gDNA Isolation Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒通过FPCB Solution裂解释放出基因组DNA,采用特殊的吸附膜,有选择性地吸附核酸分子,去除其他杂质,经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质,最后用Elution Buffer、TE或者水洗脱,得到高质量的基因组DNA。本试剂盒所得到的DNA可直接用于酶切、连接、PCR等后续的分子生物学试验。
- 适用范围广,几乎适用于所有真菌基因组DNA的抽提。
- 操作简单快速,整个提取过程在1小时左右完成。
- DNA纯度好,得率高。
组分 | 规格 |
FPCB Solution | 40mL |
BD Buffer | 20mL |
PW Solution | 18mL |
Wash Solution | 8mL |
Elution Buffer | 5mL |
吸附柱及收集管 | 50套 |
保存:室温,长期可置于2~8℃保存。
- 自备试剂:无水乙醇、异丙醇、氯仿、β-巯基乙醇、RNase A(20mg/mL)等。
- 使用前请检查FPCB Solution和BD Buffer,如有沉淀,请于55℃溶解沉淀,待冷却至室温后使用。
- 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入3倍体积的无水乙醇,混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持Wash Solution中的乙醇含量。若Wash Solution由于运输或保管不当造成容量不准,请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
- PW Solution使用前加入12mL的异丙醇。
- 提前将水浴锅调至65℃备用。
- 取50~100mg新鲜真菌或20mg干燥子实体或菌丝,液氮中充分研磨成粉末。依次加入700μL 65℃预热的FPCB Solution和7μL β-巯基乙醇,充分混匀,65℃温浴25min,间或混匀。
- 研磨是否充分会严重影响基因组的得率。研磨良好的标准是在加入FPCB Solution后,在溶液中没有大的团块。
- 所取真菌样品的用量不要超过规定量。
- 根据裂解情况可适当延长裂解时间。
- 研磨是否充分会严重影响基因组的得率。研磨良好的标准是在加入FPCB Solution后,在溶液中没有大的团块。
- 12000rpm离心10min,将上清转移至干净的1.5mL离心管中,加入700μL氯仿,充分混匀,12000rpm离心5min。
- 如果提取样品含有多酚或多糖,可以在加入氯仿前用酚:氯仿(1:1,pH8.0)等体积充分混匀,12000rpm离心5分钟,取上清,反复抽提1~3次。
- 吸取上清至一干净的1.5mL离心管中,加入40μL RNase A(20mg/mL),充分混匀,室温放置10min。
- 不要吸取到中间层变性蛋白质部分。
- 依次加入1/2体积BD Buffer和1/2体积无水乙醇(如500μL上清液需加入250μL BD Buffer和250μL无水乙醇),充分混匀。
- 加入BD Buffer后,可能产生白色沉淀,70℃水浴10分钟沉淀会消失,如果溶液仍没有澄清,说明裂解不彻底,会降低基因组DNA的得率和纯度。
- 溶液和乙醇须充分混匀,否则会影响DNA得率。
- 加入无水乙醇后,可能会产生半透明纤维状悬浮物,不影响提取和应用。
- 加入BD Buffer后,可能产生白色沉淀,70℃水浴10分钟沉淀会消失,如果溶液仍没有澄清,说明裂解不彻底,会降低基因组DNA的得率和纯度。
- 将吸附柱放入收集管中,用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加至吸附柱中,静置2min,10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- 将吸附柱放回收集管中,加入500μL PW Solution,10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- PW Solution使用前请检查是否按比例加入异丙醇。
- 将吸附柱放回收集管中,加入500μL Wash Solution,10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- Wash Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
- 将吸附柱放回收集管中,10000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中,在吸附膜中央加入50μL预热(60℃)的Elution Buffer,静置5min,10000rpm离心1min,将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl,pH8.5,可以用TE或水(pH>7.0)代替。
- 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
- 请勿使用小于40μL的洗脱液进行洗脱。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl,pH8.5,可以用TE或水(pH>7.0)代替。
相关搜索:柱式真菌基因组DNA提取试剂盒,真菌DNA提取试剂盒,SPIN-10 Column Fungal gDNA Isolation Kit