产品货号:
GS0043
中文名称:
柱式病毒基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
SPIN-10 Column Virus Genomic DNA Isolation Kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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样品根据本试剂盒提供的方法分离病毒颗粒,在特定的Digestion Buffer和Proteinase K的作用下裂解释放出基因组DNA,采用特殊的吸附膜,能够有选择性地吸附核酸分子,去除其他杂质,经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质,最后用Elution Buffer、TE或者水洗脱。得到高质量的基因组DNA。本试剂盒所得到的DNA可直接用于酶切、连接、PCR等后续的分子生物学试验。
- 无需酚和氯仿抽提,无需乙醇沉淀。
- 通常可以除去生物样品的PCR反应抑制物。
- 操作简单快速,抽提过程60分钟左右完成。
- 提取的基因组DNA纯度好,得率高。
组分 | 50T | 100T |
Digestion Buffer | 25mL | 50mL |
BD Buffer | 12mL | 24mL |
Proteinase K | 1mL | 2mL |
PW Solution | 18mL | 36mL |
Wash Solution | 8mL | 16mL |
Elution Buffer | 5mL | 10mL |
吸附柱及收集管 | 50套 | 100套 |
保存:室温
- 自备试剂:无水乙醇、异丙醇、PBS或生理盐水等。
- 使用前请检查Digestion Buffer,如有沉淀,请于55℃溶解沉淀,待冷却至室温后使用。
- 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入4倍体积的无水乙醇,混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持Wash Solution中的乙醇含量。若Wash Solution由于运输或保管不当造成容量不准,请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
- PW Solution使用前加入12mL(50T)或24mL(100T)的异丙醇。
- 提前将水浴锅调至55℃备用。
由于粪便,血清,血浆,脑脊髓分泌液,唾液,尿液,体液中含有很少量的细胞和病毒颗粒,基因组提取前通常需要将使用的样品浓缩到200μL。
- 体液样品的准备:如果制备病毒DNA的目的只是为PCR准备模板,除尿液外的大多数体液样品,如血清,血浆,脑脊髓分泌液,唾液等,可以直接使用200μL体液样品即可。
- 粪便样品的准备:取1mL粪便,加入5mL生理盐水,混匀,4000rpm离心20min。用0.22μm一次性过滤器过滤,收集滤液。滤液分装成每管200μL,-20℃保存,备用。
- 眼、鼻、喉等拭样的准备:将拭样转移至干净的离心管中,加入2mL PBS或生理盐水,室温浸泡2-5h。取上清,用Amicon Centrion-100(一种超滤膜)将上清浓缩到200μL。
- 尿液样品的准备:用Amicon Centrion-100将尿液浓缩到200μL。
- 向上述样品中依次加入400μL Digestion Buffer和20μL Proteinase K,震荡混匀1min,55℃温浴30min。间或混匀,直至充分裂解。
- 通常裂解时间为30~60分钟。
- 如果需要得到无RNA污染的DNA样品,可以在水浴后加入20μL RNase A (20mg/mL),混匀,在室温放置5分钟。
- 对于组织样品,温育时间可延长至1~3小时,直至组织完全裂解。
- 通常裂解时间为30~60分钟。
- 加入200μL BD Buffer,充分混匀。
- 加入BD Buffer后,可能产生白色沉淀,70℃水浴10分钟沉淀会消失,如果溶液仍没有澄清,说明裂解不彻底,会降低基因组DNA的得率和纯度。
- 加入400μL无水乙醇,充分颠倒混匀。
- 溶液和乙醇须充分混匀,否则会影响DNA得率。
- 加入无水乙醇后,可能会产生半透明纤维状悬浮物,不影响提取和应用。
- 溶液和乙醇须充分混匀,否则会影响DNA得率。
- 将吸附柱放入收集管中,用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加至吸附柱中,静置2min,12000rpm离心3
min,倒掉收集管中废液。 - 将吸附柱放回收集管中,加入500μL PW Solution,10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- PW Solution使用前请检查是否按比例加入异丙醇。
- 将吸附柱放回收集管中,加入500μL Wash Solution,10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- Wash Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
- 将吸附柱放回收集管中,10000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中,在吸附膜中央加入30μL预热(60℃)的Elution Buffer,静置5min,10000rpm离心1min,将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl,pH8.5,可以用TE或水(pH> 7.0)代替。
- 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
- 请勿使用小于40μL的洗脱液进行洗脱。
- 体液中病毒DNA因含量太少,通常不能用琼脂糖凝胶直接观察。
- 一般50μL PCR反应体系中取5-10 μlDNA作模板。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl,pH8.5,可以用TE或水(pH> 7.0)代替。
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