产品货号：
GS0039
中文名称：
通用型DNA提取纯化试剂盒
英文名称：
SPIN-10 Universal Column DNA Purification Kit
产品规格：
100次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是集凝胶DNA回收，质粒抽提，基因组DNA提取和纯化于一体的通用型试剂盒。
保存：室温
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- 一盒多用，避免浪费，满足科研的多种需要。
- 洗脱体积小，DNA浓度高，DNA纯度、回收率更好。
- 方便快捷，大多数抽提都可以在20分钟之内完成。
- 试剂盒所有试剂和材料与专用试剂盒完全一样。
- 从琼脂糖胶中回收DNA。
- 从溶液中回收和浓缩DNA，去除蛋白质、多糖等杂质。
- 从细菌中快速小规模抽提质粒。
- 从各种组织和细胞中小规模抽提基因组DNA。
| 组分 | 规格 |
| Binding Buffer II | 20mL |
| RNase A(10mg/mL) | 210μL |
| Solution I | 14mL |
| Solution II | 14mL |
| Solution III | 20mL |
| Digestion Buffer | 25mL |
| Wash Solution | 24mL |
| Elution Buffer | 10mL |
| Proteinase K | 200μL |
| SPIN-10吸附柱及收集管(2mL) | 100套 |
保存：室温
- 使用前先将RNase A加入Solution I溶液中，然后存放于4℃，以备使用。
- 气温低时，溶液II会出现不溶物，37℃加热溶解后方可使用。
- 首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。如果您发现Wash Solution由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
- Elution Buffer为2mM Tris-HCl，pH8.5。试验后，4℃保存。TE pH8.0或者水(pH＞7.0)均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
- 本试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置于4℃保存。
- 从细菌中提取质粒
- 将过夜培养的1～2mL细菌高速离心15秒，彻底去除上清。
- 加入250μL Solution I，用枪头或振荡器充分悬浮细菌。
- 加入250μL Solution II，立即温和混匀（倾斜45°，顺一个方向，慢慢旋转离心管），使细菌裂解，室温放置2分钟。
- 不能用振荡器混匀，也不能用力混匀，否则会出现基因组DNA污染。
- 加入350μL Solution III，立即上下颠倒5～10次，使之充分中和，室温放置5分钟。
- 12000rpm高速离心10分钟。
- 将SPIN-10柱放入收集管中，吸取上清，加到SPIN-10柱中，室温放置2分钟，8000rpm离心30秒。
- 不要吸取沉淀，否则会出现基因组DNA盒蛋白质污染。
- 去掉收集管中的废液，将SPIN-10柱放入同一支收集管中，吸取500μL Wash Solution到SPIN-10柱，10000离心1分钟。
- 重复步骤7.
- 去掉收集管中的废液，将SPIN-10柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟。
- 将SPIN-10柱放入新的洁净1.5mL离心管中，加50μL Elution Buffer，室温或37℃下放置2分钟，10000rpm离心1分钟，即得DNA样品。
- 为了提高DNA的得率，您可以将加入Elution Buffer的SPIN-10柱于55～80℃放置2分钟，然后离心。
- 将过夜培养的1～2mL细菌高速离心15秒，彻底去除上清。
- 基因组DNA提取方法
- 样品准备
- 血液：血液必须用EDTA或柠檬酸抗凝。因为从用肝素抗凝的血液抽提的DNA常有PCR抑制剂存在，不能用于PCR反应。通常从200μL血液可获约2～4μg DNA。如果需要较大量的DNA，可以用500μL血液，处理方法如下：500μL血液中加入1mL无菌水，5000rpm，离心2分钟。用200μL TE将白细胞悬浮起来备用。新鲜血液样品如不立即用于DNA抽提，可置于4℃暂存，但不要超过1个月，若长期储存，请分装成200μL，储存于-20℃。
- 血清：最好使用新鲜血清样品，否则样品应分装成200μL/管，-20℃保存。
- 细胞：通过离心将细胞收集起来，用200μL TE将细胞悬浮，细胞量在0.4～0.6×106之间即可获得足够量的DNA。
- 组织：25～30mg动物组织（新鲜或冷冻组织均可）或者50～100mg新鲜植物叶片组织在液氮中碾碎，将粉末收集到1.5mL离心管中，用200μL TE悬浮。
- 应避免多次冻融样品，因为每次冻融都将大大降低完整DNA的产率。
- 本试剂盒只适用于新鲜幼嫩的植物叶片组织，如果用于多糖多酚含量较高的其他植物组织和叶片，建议使用专门的植物基因组DNA快速抽提试剂盒(货号：GS0063)
- 血液：血液必须用EDTA或柠檬酸抗凝。因为从用肝素抗凝的血液抽提的DNA常有PCR抑制剂存在，不能用于PCR反应。通常从200μL血液可获约2～4μg DNA。如果需要较大量的DNA，可以用500μL血液，处理方法如下：500μL血液中加入1mL无菌水，5000rpm，离心2分钟。用200μL TE将白细胞悬浮起来备用。新鲜血液样品如不立即用于DNA抽提，可置于4℃暂存，但不要超过1个月，若长期储存，请分装成200μL，储存于-20℃。
- 在按样品制备方法的200μL样品中，加入400μL Digestion Buffer，混匀；加入4μL Proteinase K，混匀，55℃保温10～20分钟。
- 应按次序加入，不得将Proteinase K先加入Digestion Buffer中，再加入到样品中。
- 保温时间取决于样品的类型。对于细胞样品，55℃保温5～10分钟足以使细胞裂解，释放出基因组DNA。而对于组织类样品，55℃保温时长则视降解效果而定。降解完全的样品应是透明粘稠液体。组织类样品一般在1～3小时内作用完全。过夜处理通常不影响产率。
- 应按次序加入，不得将Proteinase K先加入Digestion Buffer中，再加入到样品中。
- 加入260μL无水乙醇，混匀，然后用1mL Tip头将样品全部转移到SPIN-10柱，柱子放入2mL收集管。
- 用台式离心机，8000rpm室温离心1分钟。也可适当降低离心转速。
- 取下SPIN-10柱，弃取离心管中的废液。将柱子放回同一个离心管中，加入500μL Wash Solution，10000rpm室温离心30秒。
- 重复步骤5一次。
- 取下SPIN-10柱，弃去收集管中的全部废液。将柱子放回统一收集管中，然后室温10000rpm离心30秒，以出去残留的Wash Solution。
- 在SPIN-10柱中央加入100μL Elution Buffer，将SPIN-10柱放入新的干净1.5mL或2.0mL离心管中，室温放置2分钟。
- 10000rpm室温离心1分钟。收集管中的液体即为基因组DNA。根据用途，样品可以4℃或-20℃保存。
- 为提高洗脱效率，可以将SPIN-10柱在55～80℃保温2分钟。
- 如果样品中基因组DNA含量很低，用40μL Elution Buffer洗脱可以提高洗脱液的样品浓度，但产率有所下降。重复步骤8～9，可以提高产率20%。
- 为提高洗脱效率，可以将SPIN-10柱在55～80℃保温2分钟。
- 分光光度计测量DNA含量按1 OD260=50μg基因组DNA，或者使用0.7%琼脂糖凝胶判定DNA的完整性，也可以判定样品中是否有RNA。本试剂盒提取出来的DNA长度可达50kb。
- 血液样品中的DNA产量取决于血细胞数量。
- 从琼脂糖凝胶仅能观察到白细胞基因组DNA，血清中病毒DNA因含量太少，不能用琼脂糖凝胶直接观察。
- 通常50μL PCR反应中用1～5μL DNA。
- 血液样品中的DNA产量取决于血细胞数量。
- 样品准备
- 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
- 用琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段与其它DNA尽可能分开，然后用干净的手术刀割下含所要回收DNA的琼脂块，放入1.5mL离心管中。判定DNA片段的位置时，要尽可能使用长波长紫外光，在紫外光下照射的时间应尽可能短。
- 按每100mg琼脂糖凝胶加入400μL Binding Buffer II，混匀后置于50～60℃水浴中10分钟，使胶彻底融化。加热融胶时，每2分钟混匀一次。对于高浓度的较(1.5～2%)，每100mg胶加入700μL Binding Buffer II，加热融胶的时间可以延长到15分钟，以保证凝胶全部融化。
- 将融化的胶溶液全部转移到SPIN-10柱，柱子放入2mL收集管，室温放置2分钟，用台式离心机，8000rpm室温离心1分钟。
- 取下SPIN-10柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回原离心管中，加入500μL Wash Solution，10000rpm室温离心30秒。
- 重复步骤4一次。
- 取下SPIN-10柱，弃去离心管中的全部废液。将柱子放回同一个离心管中，10000rpm室温离心30秒，以除去残留的Wash Solution。
- 将柱子放入新的干净1.5mL或2mL离心管中，在柱子中央加入100μL Elution Buffer，室温放置2分钟，提高洗脱液的温度至55～80℃有利于提高DNA的洗脱效率。
- 10000rpm室温离心1分钟。收集管中的液体即为回收的DNA片段，可立即使用或保存-20℃备用。
- 用琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段与其它DNA尽可能分开，然后用干净的手术刀割下含所要回收DNA的琼脂块，放入1.5mL离心管中。判定DNA片段的位置时，要尽可能使用长波长紫外光，在紫外光下照射的时间应尽可能短。
- 从溶液中回收和浓缩DNA
- 对于纯化基因组：按每100μL DNA溶液加入100μL Bind Buffer II；对于纯化DNA片段(60bp～10kb)：按每100μL DNA溶液加300μL Binding Buffer II，混匀，放置2分钟。
- 对于10～40kb DNA片段，也按每100μL DNA溶液加300μL Binding Buffer II，但是回收效率只有30～50%。
- 全部转移到SPIN-10柱，柱子放入2mL收集管，室温放置2分钟，用台式离心机，10000rpm室温离心1分钟。
- 取下SPIN-10柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回同一个离心管中，加入500μL Wash Solution，10000rpm室温离心30秒。
- 重复步骤3一次。
- 取下SPIN-10柱，弃去离心管中的全部废液。将柱子放回原离心管中，10000rpm室温离心30秒，以出去残留的Wash Solution。
- 将SPIN-10柱放入新的干净1.5mL或2mL离心管中，在SPIN-10柱中央加入Elution Buffer，室温放置2分钟，提高洗脱温度至55～80℃有利于提高DNA的洗脱效率。
- 10000rpm室温离心1分钟。收集管中的液体即为回收的DNA片段，可立即使用或保存于-20℃备用。
- 对于纯化基因组：按每100μL DNA溶液加入100μL Bind Buffer II；对于纯化DNA片段(60bp～10kb)：按每100μL DNA溶液加300μL Binding Buffer II，混匀，放置2分钟。
相关搜索：通用型DNA提取纯化试剂盒，通用型DNA提取试剂盒，柱式DNA提取纯化试剂盒，SPIN-10 Universal Column DNA Purification Kit