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游离DNA是存在于血浆或血清、脑脊液等体液中的细胞外DNA，也叫循环DNA。本制品采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，适用于从血清、血浆、脑脊液等无细胞体液中分离纯化高质量的游离DNA。本制品即可满足手工提取也适用于多种高通量平台批量提取。纯化得到的DNA可直接用于PCR，定量PCR，文库构建，液相芯片分析等应用。

• 该试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置4℃保存。
  
• Buffer MFL中含有刺激性化合物，操作过程中应避免直接接触，如沾染皮肤或眼睛请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
  
• 本试剂盒组分以400μL样本为基础，如果提取其它规格的样本，试剂不够时需另行购买。
  
• 本试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在CW1 Solution中加入相应量的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记，于室温密封保存。
  
  19.5mL CW1 Solution中加入25.5mL无水乙醇；39mL CW1 Solution中加入51mL无水乙醇。
  
  
• 每次使用前请检查Buffer MFL是否出现沉淀，如有沉淀，请于56℃溶解沉淀后使用。

1. 根据样品体积按下表选择合适规格的离心管并依次添加试剂。
   

   样品体积 (μL)	离心管规格	Buffer MFL 1.5倍样品体积(μL)	Proteinase K 0.1倍样品体积(μL)	DyeMag磁珠 (μL)
   400	1.5mL	600	40	30
   600		900	60
   2000	5mL	3000	200	45
   4000	15mL	6000	400	90

   本试剂盒以400μL样本为基础，如果提取其它规格的样本，请按照表格中的用量进行增加。
   
   
2. 涡旋振荡混匀后室温孵育20min，期间每3～5min上下颠倒混匀10sec，使磁珠和核酸充分结合。孵育结束后需简短离心以去除管盖内壁的液滴。
   
3. 将离心管置于磁力架上2min，待磁珠完全吸附后用移液器小心去除液体，取下离心管。
   
4. 加入700μL CW1，上下颠倒混匀30sec使磁珠充分悬浮，短暂离心以去除管盖内壁的液滴。将离心管置于磁力架上1min，待磁珠完全吸附后用移液器小心去除液体，取下离心管。
   
   使用前注意CW1 Solution中是否按比例加入无水乙醇。
   
   
5. 加入700μL 80%乙醇，上下颠倒混匀30sec使磁珠充分悬浮，短暂离心以去除管盖内壁的液滴。将离心管置于磁力架上1min，待磁珠完全吸附后用移液器小心去除液体，取下离心管。
   
6. 重复步骤5一次。
   
7. 将离心管置于磁力架上，吸出所有液体弃去，室温晾干5～10min。
   
   乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不能干燥太长时间，以免难以洗脱核酸。
   
   
8. 加入30～65μL洗脱缓冲液TE Buffer，用移液器吹吸，使磁珠重新悬浮，56℃孵育5min，期间每2min轻轻晃动使核酸充分洗脱。
   
   • 如需提高DNA的得率，可重复步骤8或将TE Buffer 60℃预热。
     
   • 如需提高得到的DNA浓度，可以减少洗脱液TE Buffer至30μL。
9. 将离心管置于磁力架上静置2min，待磁珠完全吸附时小心将DNA溶液转移至新的离心管中，提取的DNA溶液可立即进行下一步实验或-20℃保存。