产品货号：
BTN80803
中文名称：
动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)
英文名称：
Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade)
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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动物线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式动物mtDNA提取方法需要先温和裂解动物细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化，因此纯化效果差异很大。本方法克服了上述缺点。
- 不需要单独纯化线粒体，操作简单快捷。
- 得到的动物mtDNA只能用于PCR分析，不能用于其它实验。
- 可以用于培养的动物细胞，实体动物组织和血液。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克实体动物组织一般能得到1～2μg mtDNA。
| 组分 | 规格 |
| 动物线粒体DNA纯化溶液A | 13mL |
| 动物线粒体DNA纯化溶液B | 13mL |
| 动物线粒体DNA纯化溶液C | 18mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脱液 | 10mL |
保存：室温，有效期1年。
待处理样品、0.25%胰酶消化液、PBS缓冲液、1.5mL塑料离心管
本制品不能用于纯化植物线粒体DNA。
一、培养细胞的预先处理（本试剂盒不含相关试剂）
- 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养的动物细胞，离心收集后弃上清，保留细胞沉淀。
- 用PBS缓冲液洗涤细胞沉淀两次，最后得到的细胞沉淀将直接用作动物mtDNA提取的材料。
二、动物组织细胞预处理（本试剂盒不含相关试剂）
- 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎（芝麻大小最好），转移到1.5mL塑料离心管中，直接用作动物mtDNA提取的材料。
- 不能使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体膜和细胞膜刺破，其DNA已经释放出来，被体液中的DNA酶降解。
三、血液预处理
- 将3～5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
- 用自备PBS缓冲液洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四、线粒体粗提物制备
- 用自选方法将107个培养细胞或1g实体组织匀浆。
- 室温700×g离心6分钟，收集上清。
- 将上清在室温10000×g离心10分钟，得线粒体粗提物沉淀。
五、mtDNA提取
- 在细胞沉淀或剪碎的组织或线粒体粗提物沉淀中加入250μL冰浴的动物线粒体DNA纯化溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
- 加入250μL常温的动物线粒体DNA纯化溶液B，轻柔颠倒混匀10次，不要剧烈振荡。
- 如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用。
- 冰上放置6～8分钟。注意不要超过8分钟。
- 加入350μL冰浴的动物线粒体DNA纯化溶液C，轻柔颠倒混匀6次，可见白色沉淀物产生。冰上放置20分钟。
- 室温13000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
- 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
- 室温13000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
- 加入500μL的通用洗柱液，室温13000g离心1分钟，弃收集管中废液。
- 重复上步1次。
- 室温13000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留通用洗柱液会影响DNA的后续使用（如DNA上样时不能沉淀到加样孔中）。
- 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入50μL DNA洗脱液，室温放置2分钟。
- 室温13000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克实体动物组织一般能得到3～5μg的mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。本试剂盒得到的mtDNA一般有断裂，电泳时不呈现专一的带，但不影响作为PCR模板。
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