产品货号:
BTN70903
中文名称:
一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL)
英文名称:
One-Step Plasmid Kit(0.5-5mL)
产品规格:
100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用一步式细菌裂解技术,只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。
试剂盒特点:
试剂盒组成:
保存条件:
常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。
使用方法:
本方法提取的质粒DNA有如下特点:
相关搜索:一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL),质粒小提试剂盒,质粒小量提取试剂盒,质粒提取试剂盒,质粒DNA小提试剂盒,质粒DNA小量提取试剂盒,质粒DNA提取试剂盒,一步法质粒小提试剂盒,一步法质粒小量提取试剂盒,一步法质粒提取试剂盒,一步法质粒DNA小提试剂盒,一步法质粒DNA小量提取试剂盒,一步法质粒DNA提取试剂盒,,One-Step Plasmid Kit(0.5-5mL)
试剂盒特点:
- 一步式,提取一个样品只需5分钟左右,比传统的碱变性方法快捷。
- 适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝质粒的提取。适用于各种E.coli宿主菌。
- 质粒DNA产量跟经典碱变性法相当,一般1~5mL可以得到3~15μg(对低拷贝质粒)和5~35μg(对高拷贝质粒)。
- 所得质粒DNA呈超螺旋结构的比例比碱变性法更高。
- 基因组DNA污染少。但由于操作太快,溶液中的RNase来不及降解RNA,一般会有少量RNA污染,但不影响后续实验。
- 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等后续实验
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
一步法质粒DNA提取试剂盒溶液A | 70mL |
离心吸附柱(宽口) | 50套×2 |
通用洗柱液 | 50mL×2 |
DNA洗脱液2.0 | 10mL |
保存条件:
常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。
使用方法:
- 用塑料离心管收集0.5~5mL过夜培养的饱和新鲜菌液,室温14000g离心半分钟,弃上清(培养基)。也可以使用-20℃冻存的细菌沉淀和4℃放置过夜的饱和细菌培养液,但质粒回收效率稍低。如果是中拷贝和高拷贝质粒,使用1.5mL菌液即可,如果是低拷贝质粒,最好使用3~5mL菌液。常见质粒拷贝数请参考附表。
- 在细菌沉淀中加入700μL溶液A,充分吹打或涡旋振荡半分钟。
- 将裂解液全部转移到离心吸附柱中,直接离心。如果静置3~5分钟后再离心,会提高质粒产量10%左右。
- 室温14000g离心1分钟,弃穿透液。如果使用3~5mL起始菌液,则此步的离心时间可以延长1分钟以确保所有液体成功过柱,吸附柱中没有残留液体。
- 在离心吸附柱中加入700μL的通用洗柱液,室温14000g离心半分钟,弃穿透液。
- 室温14000g离心半分钟,甩尽残留液体。
注意:此步不能省略。 - 将离心柱置于一个自备的1.5mL塑料离心管中,在离心柱中加入30~50μL DNA洗脱液2.0(对低拷贝质粒建议用30μL洗脱,对高拷贝质粒建议用50μL洗脱)。
- 室温14000g离心半分钟,离心管底溶液即质粒DNA,可以直接用于后续实验(浓度测定、酶切、电泳和测序)或放冰箱长期保存。
本方法提取的质粒DNA有如下特点:
- 因为没有使用剧烈的碱变性步骤,所以质粒呈现天然的超螺旋结构的比例较大。
- 由于整个操作非常快速,又没有使用碱来降解RNA,所以试剂中的RNase都来不及把细菌的内源RNA彻底降解,故所得质粒比碱变性法提取的质粒有更多的RNA污染,因此不建议使用测OD的方法确定质粒DNA的浓度,故最好采用电泳比较法,即通过比较质粒DNA跟浓度已知的DNA marker的相对亮度来确定质粒的浓度。注意:RNA污染一般不影响电泳、酶切和测序。
- 如果需要进一步去除RNA污染,可以在第5步后再增加一步洗柱操作,即在离心吸附柱中加入300μL的通用洗柱液,室温14000g离心半分钟,弃穿透液,再进入下一步。
- 一般1~5mL菌液可以得到3~15μg(对低拷贝质粒)或5~35μg(对高拷贝质粒)质粒DNA。如果需要进一步提高质粒DNA产量,可以再加30~50μL DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中再次洗脱,可以得到相当于第一次洗脱量10~20%的质粒DNA。也可以将第一次洗脱得到的质粒DNA溶液再加到离心吸附柱中洗脱,可以使质粒DNA产量提高10~20%。
相关搜索:一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL),质粒小提试剂盒,质粒小量提取试剂盒,质粒提取试剂盒,质粒DNA小提试剂盒,质粒DNA小量提取试剂盒,质粒DNA提取试剂盒,一步法质粒小提试剂盒,一步法质粒小量提取试剂盒,一步法质粒提取试剂盒,一步法质粒DNA小提试剂盒,一步法质粒DNA小量提取试剂盒,一步法质粒DNA提取试剂盒,,One-Step Plasmid Kit(0.5-5mL)