产品货号:
ALH160
中文名称:
凋亡小体荧光染色试剂盒
英文名称:
Hoeschst apoptotic body Stain Kit
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒中的Hoechst染料紫外光激发波长350~370nm;发射波长465nm,在荧光显微镜下DNA发出蓝色荧光。
凋亡中晚期细胞形态学变化为染色质在局部区域凝集,固缩,继而核碎裂出现凋亡小体。在Hoeschst染色下,细胞核或者凋亡小体的DNA会呈现致密浓染或者碎块状致密浓染。
组分 | 规格 |
固定液 | 50mL |
100×染色浓缩液 | 0.5mL |
染色稀释缓冲液 | 50mL |
保存:4℃,避光,有效期6个月。
- 需可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
- 需PBS或0.9%NaCl溶液,盖玻片与载玻片。
- 荧光容易淬灭,应该尽量避光操作和保存。
- 贴壁细胞
- 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9% NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%~80%满。
- 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5mL固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
本试剂盒使用固定液主要为4%多聚甲醛,如果不适合您的细胞或者效果不佳,很多种固定配方如细胞固定液(甲醇:冰乙酸=3:1,现配),都可以使用,可以根据自己细胞特点选用适合的固定方法。 - 去固定液,用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。
- 取5μL 100×染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后加入染色5~10分钟,也宜用摇床,或手动晃动数次。
- 用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。
- 滴一滴封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封片液,切勿弄反。荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右,发射波长在460nm左右。
封片液可使用50%PBS/50%甘油(等体积混合),如果荧光淬灭太快影响观察,应该选用商品化的抗荧光淬灭封片液。
- 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9% NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%~80%满。
- 悬浮细胞
- 离心收集细胞样品于1.5mL离心管内,加入0.5mL固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
- 离心去固定液,用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。洗涤期间手动晃动。
- 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50μL液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀。
- 稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
- 取5μL 100×染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后均匀滴上染色5~10分钟,用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。
- 用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。
- 和贴壁细胞一样封片观察。
- 离心收集细胞样品于1.5mL离心管内,加入0.5mL固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
- 组织切片
- 对于任何常见切片,处理至常规可以进行免疫染色时,或完成常规的免疫染色后,即可进行后续的Hoeschst染色。
- PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。可在六孔板中操作。
- 取5μL 100×染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后加入染色5~10分钟,也宜用摇床,或手动晃动数次。
- 用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。
- 和贴壁细胞一样封片观察。
- 对于任何常见切片,处理至常规可以进行免疫染色时,或完成常规的免疫染色后,即可进行后续的Hoeschst染色。
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