产品货号:
ALH151
中文名称:
大量植物样本DNA提取试剂盒
英文名称:
Plant Massive DNA Rapid Extraction Kit
产品规格:
10T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于快速提取植物组织、细胞的基因组DNA。采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在1小时左右完成一个或多个1g新鲜或200mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
- 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
- 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
- 快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
- 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。
组分 | 规格 |
RNase A(10mg/mL) | 500μL |
缓冲液AP1 | 50mL |
缓冲液AP2 | 20mL |
缓冲液AP3/E | 40mL |
漂洗液WB | 25mL×2 |
洗脱缓冲液EB | 20mL |
吸附柱AC | 10个 |
收集管(50mL) | 10个 |
保存:室温,有效期1年。
- 裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3/E加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
- 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
- 缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
- 不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般1g新鲜组织典型产量可达30~260μg。
- 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
- 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
- 第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇!
- 将缓冲液AP1在65℃水浴预热。
- 取适量植物组织(最大处理量不超过新鲜组织1g或干重组织200mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
- 转移细粉到一个15mL离心管,不要解冻,加入5mL缓冲液AP1(已经65℃预热)和40μL RNase A(10mg/mL),旋涡振荡,充分混匀帮助裂解。
- 如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织,因为后面有一个离心去除的步骤。
- 可选:多糖含量特别高的时候可以在AP1加入2% PVP40000;多酚含量特别高的时候可以在AP1中加入0.2% β-巯基乙醇。也可两者同时加入。
- 如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织,因为后面有一个离心去除的步骤。
- 65℃水浴10~15分钟,在水浴过程中颠倒离心管2~3次,混合样品。
- 加入1.8mL缓冲液AP2,充分混匀,冰上放置10分钟,9000×g室温离心10分钟,小心吸取上清到一个新的50mL离心管,注意不要吸到界面物质。
- 如果没有高速离心机,也可以4000~5000×g离心,适当延长时间即可。
- 计算上清量,加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!),立即涡旋振荡混匀。
- 加入AP3/E可能会出现絮状沉淀,但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即涡旋振荡混匀。
- 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)3000~5000×g离心5分钟,倒掉收集管中的废液。
- 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),3000~5000×g离心4分钟,弃掉废液。
- 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),3000~5000×g离心3分钟,弃掉废液。
- 将吸附柱AC放回空收集管中,最高速(最好大于9000×g,如果离心机转速低,需要相应延长离心时间)离心10分钟以干燥膜基质残留乙醇,用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇,室温或者烘箱晾干几分钟。
- 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加1~2mL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液可事先在65~70℃水浴中预热),室温放置5分钟,3000~5000×g离心3分钟,得到DNA。此外将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟后再洗脱一遍,可以提高浓度和产量。
- 洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于500μL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
- DNA可以存放在2~8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
问题 | 分析 |
DNA产量低 |
|
RNA残留 |
|
未提取到DNA |
|
离心柱堵塞 |
|
洗脱下来的DNA溶液带颜色或者膜上有明显的色素残留 |
|
洗脱下来的DNA产量低 |
|
A260吸光值异常偏高 |
|
DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全 |
|
相关搜索:大量植物样本DNA提取试剂盒,植物DNA提取,植物基因组DNA提取,植物gDNA提取,大量植物样本,Plant Massive DNA Rapid Extraction Kit