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本试剂盒适用于琼脂糖凝胶DNA的纯化回收。在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。

• 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
  
• 使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
  
• 溶胶液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
  
• 改进的溶胶液配方，大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将pH缓冲在最佳结合范围内。
  
• 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

• 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。
  
• 储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃～25℃）进行。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
  
• 硅胶膜吸附柱使用前先用平衡液预处理，具体方法参见附录参考“关于平衡液的使用”。
  
• 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
  
• 溶胶液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
  
• 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。
  
• 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1～15μg，100bp～5kb的DNA片段，回收率可高达85％。
  
• 切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
  
• 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

• 在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。
  
• 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5mL离心管，称重。
  先称一个空1.5mL离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。
  
• 加3倍体积溶胶液DD。
  如果凝胶重为100mg，其体积可视为100μL，则加入300μL溶胶液。
  如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液。
  
• 56℃水浴放置10分钟（或直至胶完全溶解）。每2～3分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解。
  
• 可选，一般不需要：每100mg最初的凝胶重量加入150μL的异丙醇，震荡混匀。
  有时候加入异丙醇可以提高回收率，加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时，不加入异丙醇，加入有时反而可能降低回收效率。
  
• 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12000rpm离心30～60秒，倒掉收集管中的废液。
  使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见附录参考“关于平衡液的使用”。
  如果总体积超过750μL，可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。
  过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后，溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色，此为酚红pH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。
  
• 加入600μL漂洗液WB （请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 加入600μL漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 将吸附柱EC放回空收集管中，12000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65～70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1分钟。
  洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于25μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。

• 核酸产量低或者纯度不高
  
  • 试剂盒储存在非最佳条件
    建议：收到试剂盒后总是存放在室温（15℃～20℃）。
    
  • 缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下
    建议：储存在室温（15℃～20℃），每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发，pH改变和污染。
    
  • 漂洗液WB中忘记加无水乙醇
    建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇。
    
  • 试剂和要回收溶液如PCR产物没有充分混匀
    建议：加入每个试剂后都要充分混匀。
• 洗脱后回收率低
  
  • 使用了非最佳的洗脱液，洗脱液的高pH非常重要
    建议：不要用水洗脱，用试剂盒带的洗脱液EB。
• 回收后DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全
  
  • 忘记做步骤9，乙醇抑制了酶切反应
    建议：做步骤9，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。
    
  • 一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应
    建议：将洗脱的回收DNA溶液13000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。
• 纯化的DNA产物OD260数值异常偏高
  
  • 一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了分光光度计读数
    建议：将洗脱的回收DNA溶液13000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。
• 洗脱液中不含DNA
  
  • 在初始处理材料中没有PCR产物
    建议：开始回收前，用琼脂糖凝胶/EB电泳检测PCR产物。
• 回收后DNA的浓度太低
  
  • 起始的处理材料中DNA含量太低
    建议：加大处理量和减少洗脱液的体积，但注意不要少于30μL。
    
  • 回收的片段小于100bp或者大于10kb
    建议：片段小于100bp或者大于10kb回收效率都会迅速降低，可尝试提高起始处理量。
• 回收产量不高
  
  • 洗脱不完全
    建议：可使用2次洗脱缓冲液EB洗脱（每次30μL），合并两次洗脱液。

• 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。
  
• 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μL的平衡缓冲液至柱子中。13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。