产品货号:
YTB1404
中文名称:
ArcticExpress(DE3)pRARE2感受态细胞
英文名称:
ArcticExpress(DE3)pRARE2 Super Competent Cells
产品规格:
10×100μL|50×100μL
发货周期:
1~3天
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本制品是一种用于可溶重组蛋白表达用的E.coli ArcticExpress (DE3) pRARE2即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达1×108cfu/μg DNA以上。
ArcticExpress (DE3) pRARE2在ArcticExpress (DE3)基础上改造而成。该菌株在低温条件下(4~12℃)具有优异的蛋白折叠功能,防止包涵体形成,增加具有生物活性的重组蛋白的得率。
ArcticExpress (DE3)携带pRARE2质粒,该质粒表达适应低温的伴侣蛋白cpn10和cpn60。在低温下比传统伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更强的促蛋白折叠功能;此外,带有氯霉素抗性的pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA和CGG)对应的tRNA,达到高效表达的目的。
ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,因而广泛用于pET系列、pGEX、pMAL等质粒的蛋白表达。该菌株具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性。
ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株的基因型为E.coli B F–ompT hsdS(rB–,mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)。
组分 | 10×100μL | 50×100μL |
ArcticExpress(DE3)pRARE2感受态细胞 | 10×100μL | 50×100μL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:-80℃,有效期1年。
- 感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。
- 通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。
- 感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。
- 待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。
- 感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。
- 感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。
- 通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。
- 解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用,放置时间过长会影响转化效率。
- DNA样品的转化。取一管感受态细胞,加入DNA样品,例如质粒、连接产物或重组产物等,轻轻弹击管底约2~3次或轻轻晃动约2~3次以混匀,立即冰浴静置30分钟。
- 所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10分钟,后续可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。
- 热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
- 复苏培养。加入900μL不含抗生素的LB培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增,复苏培养10~20分钟也完全足够了;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议严格进行复苏培养操作。
- 收菌涂板。约5000×g室温离心1分钟,沉淀细菌,吸除约900~950μL上清,余下约50~100μL上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体,随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。
- 如果用于质粒的转化扩增,可以仅取少量进行涂板;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议取所有重悬的菌液涂板。
- 将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
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