加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

pET-Dual-N-GST-PreScission质粒图片
产品货号:
YT974
中文名称:
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒
英文名称:
pET-Dual-N-GST-PreScission Plasmid
产品规格:
1μg|100μg
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒,其中一种可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag,GST tag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS),每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点(rbs),因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。

在共表达两个蛋白的复合物时,通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点,宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化,可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与第一个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP,对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC,配合使用我司生产的PreScission Protease(货号:YT982)4℃酶切过夜,第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物,这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然,本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因,这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。

pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下:
Feature NucleotidePosition
T7 transcription start-11
GST-taq coding sequence71-727
PreScission Protease recognation site sequence728-751
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI)752-802
T7 promoter-2859-875
T7 transcription start-2876
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI)943-1004
S Tag coding sequence1011-1055
T7 terminator1107-1154
f1 origin1192-1639
bla(Ap)coding sequence1764-2621
pBR322 origin3382
lacI coding sequence4576-5658
T7 promoter-16049-6065


pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下:
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱

pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
MCS1-N Primer(626-647):5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
MCS1-C Primer(853-834):5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
MCS2-N Primer(834-853):5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
T7 terminator Primer(1093-1111):5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pET-Dual-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
相关搜索:pET-Dual-N-GST-PreScission质粒pET-Dual-N-GST-PreScission载体pET-Dual-N-GST-PreScission Plasmid
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3