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pET-N-GST-PreScission质粒图片
产品货号:
YT971
中文名称:
pET-N-GST-PreScission质粒
英文名称:
pET-N-GST-PreScission Plasmid
产品规格:
1μg|100μg
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
pET-N-GST-PreScission是一种用于表达N端含有GST-tag的目的蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有PreScission酶切位点,可通过PreScission Protease(货号:YT982)切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。

本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP,对应的核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST标签。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。

通常可以采用如GoldBalb GST-tag Purification Resin(货号:YT958)和GST标签蛋白纯化试剂盒(货号:YT959)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体(货号:YT784或YT722)检测和少量地分离纯化目的蛋白。

pET-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下:
Feature NucleotidePosition
f1 origin12-467
Kanamycin resistance ORF563-1645
PBR 322 origin2084
LacI coding sequence3518-4597
T7 promoter4988-5004
GST tag coding sequence5076-5732
PreScission recognition site sequence5733-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)5757-5804
T7 Terminator5872-5918


pET-N-GST-PreScission质粒(5943bp)的图谱如下:
pET-N-GST-PreScission质粒(5943bp)的图谱

pET-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
pET-F primer(5619-5638):5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer(5857-5876):5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pET-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
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