产品货号:
WH0190
中文名称:
DH5a感受态细胞
英文名称:
DH5α Competent E.coli
产品规格:
100 μl×5|100 μl×10|100μl×20
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/ug,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。
该菌株一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
基因型:
保存条件:-70℃冻存,有效期6个月。
操作步骤:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1.取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2.向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻弹混匀,在冰浴中静置30min。
3.将离心管置于42℃水浴中放置60-90sec,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3 min,该过程不要摇动离心管。
注意:此步骤也可将离心管置于室温进行,时间不需十分准确,夏季或室温较高时,可放置5-8 min左右,如果室温较低,可延长时间至8-15 min左右。条件允许建议使用42℃热激方法。
4.向每个离心管中加入900 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床振荡培养45min (150rpm),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5.将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16h。
注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4000 rpm,2 min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
注意事项:
1.感受态细胞应保存在-70℃,不可冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
2.进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3.为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。
相关搜索:DH5a感受态细胞,DH5α Competent E.coli
该菌株一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
基因型:
保存条件:-70℃冻存,有效期6个月。
操作步骤:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1.取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2.向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻弹混匀,在冰浴中静置30min。
3.将离心管置于42℃水浴中放置60-90sec,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3 min,该过程不要摇动离心管。
注意:此步骤也可将离心管置于室温进行,时间不需十分准确,夏季或室温较高时,可放置5-8 min左右,如果室温较低,可延长时间至8-15 min左右。条件允许建议使用42℃热激方法。
4.向每个离心管中加入900 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床振荡培养45min (150rpm),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5.将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16h。
注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4000 rpm,2 min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
注意事项:
1.感受态细胞应保存在-70℃,不可冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
2.进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3.为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。
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