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本试剂盒在室温(25℃)反应5分钟可完成DNA粘性末端或平齐末端的连接反应。试剂盒含有Quick T4 DNA Ligase和为快速高效DNA连接优化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。快速连接的连接效率相当于用T4 DNA Ligase进行常规连接1小时。快速连接产物可直接用于常规的细菌转化实验。

• 本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5分钟甚至更短时间内达到反应终点，增加反应时间反应效率不会增强。如用快速连接反应1小时后，转化效率会明显降低；如25℃快速连接反应过夜，则转化效率会下降到75%。
  
• 2×Quick Ligation Reaction Buffer含有ATP，使用前置于冰上使其融化后充分混匀，建议初次使用分装成小管冻存，避免其反复冻融影响DNA连接效率。
  
• 由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深，以免粘在枪头上造成损失。
  
• 如快速连接产物用于电转，快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化（如PCR产物快速纯化试剂盒）后再进行电转。

• 按以下体系配制反应液：
  

  成分	用量
  Vector DNA	X μL(10～100ng)
  Insert DNA	Y μL
  2×Quick Ligation Reaction Buffer	10μL
  Quick T4 DNA Ligase(15U/μL)	1μL
  RNase-Free Water	补足至20μL

  注：Vector DNA和Insert DNA的摩尔比一般为1:3～1:8，可根据实验情况选择适当的Vector DNA和Insert DNA的摩尔数比。DNA摩尔数计算方式：DNA摩尔数(nmol)=DNA质量(ng)/(660 daltons×插入DNA碱基数bp)。
  
• 轻轻混合，短暂离心。25℃反应5分钟。
  注意：反应时间不要超过15分钟，否则会降低连接效率。
  
• 勿进行加热失活反应。瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
  注意：因缓冲液中含有PEG，加热失活会显著降低转化效率。
  
• 反应结束后，将DNA连接产物存放于0～4℃，而后进行转化实验；也可将DNA连接产物置于-20℃保存。
  注意：用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
  
• 将连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1～2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
  注意：
  
  • 用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
    
  • 如快速连接产物用于电转，因快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。