DH5α感受态细胞

产品货号：

SN0078

中文名称：

DH5α感受态细胞

英文名称：

DH5α Chemically Competent cell(SCC12)

产品规格：

100μL×10

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

DH5α感受态细胞经优化的感受态制备工艺制作而成，可用于DNA的化学转化。DH5α菌株缺失核酸内切酶（endA），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型（recA）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。

基本信息：
基因型：F- Φ80(lacZ)ΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-，mk+）supE44 λ- thi-1gyrA96 relA1 phoA
转化效率：使用pUC19质粒DNA检测，转化效率高达1×10⁹cfu/μg

适用范围：

DH5α感受态细胞适用于DNA的化学转化、蓝白斑筛选等实验，是实验室最常用的感受态细胞之一。

产品组成：

组分	规格
DH5α感受态细胞	100μL×10
pUC19对照质粒(10ng/μL)	10μL

保存：-80℃，有效期6个月。

注意事项：

请勿将感受态反复冻融。
感受态细胞应插入冰上缓慢融化（请勿用手握化）后立即加入目的DNA，此时转化效率最高。
感受态细胞融化后长时间置于冰上不加目的DNA会降低转化效率。
加入目的DNA时应轻柔操作。
目的DNA不能超过感受态总体积的1/10。

使用方法：

取100μL冰上融化的感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻柔混匀，冰上静置30min。
42℃水浴热激45s，迅速冰上静置2min。
注意不要晃动离心管，以免降低转化效率。
向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（2×YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏1h。
根据实验需求吸取不同体积的感受态细胞加到含有相应抗生素的2×YT或LB固体培养基上，均匀涂开后吹干平板。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

常见问题：

转化后平板不长菌或长菌数较少？
- 上游连接效率较低。建议检查上游插入片段质量、连接比例、反应温度及时间是否合适；
- 感受态细胞失效或效率降低。使用新鲜感受态细胞，感受态请勿反复冻融，建议使用本制品中附带pUC19质粒做一组阳性对照实验；
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，抗生素种类、用量是否正确，建议重新配制平板重复实验。
转化后平板出现卫星菌落或杂菌？
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，用量是否正确，氨苄抗性可适当提高抗生素浓度；
- 培养温度或时间不合适。检查培养箱温度，37℃培养时间不宜过长；
- 存在污染。感受态细胞在操作过程中被污染，建议做一组阴性对照实验（不加DNA只转化空感受态于抗性平板）检查操作过程是否污染了相同抗性的菌株。若存在污染，建议更换试剂及耗材，可使用核酸清洁剂对实验台面、环境进行清洁。

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