BL21(DE3)pLysS感受态细胞

产品货号：

SN0075

中文名称：

BL21(DE3)pLysS感受态细胞

英文名称：

CheCom BL21(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

产品规格：

100μL×10

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

BL21(DE3) pLysS感受态细胞经优化的感受态制备工艺制作而成，可用于DNA的化学转化。该菌株内包含有一个低拷贝的氯霉素抗性质粒(可与pET28a、PGEX4T-2等常见质粒兼容)，可少量表达T7溶菌酶，在未诱导情况下，该酶能与T7 RNA聚合酶结合并抑制其功能，当加入IPTG诱导表达时，T7RNA聚合酶大量表达，细胞中少量的T7溶菌酶不会对大量存在的T7 RNA聚合酶产生较大的抑制作用。因此该质粒既可以降低外源基因的泄露表达，也不干扰IPTG的诱导表达，相对于BL21 (DE3)感受态细胞可以降低90%的本底表达，可用于毒性蛋白的表达。

基本信息：
基因型：F^- ompT hsdS(rB^-，mB^-) gal dcm(DE3) pLysS Cam^r。
转化效率：使用pUC19质粒DNA检测，转化效率高达1×10⁸ cfu/μg。

适用范围：

BL21(DE3) pLysS感受态细胞适用于DNA的化学转化、蛋白表达等实验，可以降低90%的本底表达，可用于毒性蛋白的表达。

产品组成：

组分	规格
BL21(DE3) pLysS感受态细胞	100μL×10
pUC19对照质粒(10pg/μL)	10μL

保存：-80℃，有效期6个月。

注意事项：

本制品具有氯霉素抗性。
请勿将感受态反复冻融，加入目的DNA时应轻柔操作。
感受态细胞应插入冰上缓慢融化（请勿用手握化）后立即加入目的DNA，此时转化效率最高。
感受态细胞融化后长时间置于冰上不加目的DNA会降低转化效率。
目的DNA不能超过感受态总体积的1/10。
转化后涂板，平板不可加入氯霉素，否则双抗生素条件下，细菌生长十分缓慢，但诱导表达摇菌时，应加入双抗，防止氯霉素质粒丢失（此时生长速度正常）。

使用方法：

取100μL冰上融化的感受态细胞，加入目的质粒，轻柔混匀，冰上静置30min。
42℃水浴热激45s，迅速冰上静置2min。
注意不要晃动离心管，以免降低转化效率。
向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（2×YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏1h。
根据实验需求吸取不同体积的感受态细胞加到含有相应抗生素的2×YT或LB固体培养基上，均匀涂开后吹干平板。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

常见问题：

转化后平板不长菌或长菌数较少？
- 建议检查上游质粒质量、反应温度及时间是否合适；
- 感受态细胞失效或效率降低。使用新鲜感受态细胞，感受态请勿反复冻融，建议使用本制品中附带pUC19质粒做一组阳性对照实验；
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，抗生素种类、用量是否正确，建议重新配制平板重复实验。
转化后平板出现卫星菌落或杂菌？
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，用量是否正确，氨苄抗性可适当提高抗生素浓度；
- 培养温度或时间不合适。检查培养箱温度，37℃培养时间不宜过长；
- 存在污染。感受态细胞在操作过程中被污染，建议做一组阴性对照实验（不加DNA只转化空感受态于抗性平板）检查操作过程是否污染了相同抗性的菌株。若存在污染，建议更换试剂及耗材，可使用核酸清洁剂对实验台面、环境进行清洁。

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