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Rosetta 2(DE3)菌株来源于BL21，是BL21的衍生菌株，为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21 (DE3)细胞中即是Rosetta 2(DE3)，pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Rosetta2(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达10⁸ cfu/μg DNA。

• 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
  
• 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  
• 诱导时，IPTG浓度可选（0.1～10mM均可）。
  
• 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
  
• Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34μg/ml氯霉素，以防质粒丢失。

• Rosetta 2(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
  
• 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
  
• 向离心管中加入700μL不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200rpm复苏60分钟。
  
• 5000rpm离心一分钟收菌，留取50μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
  
• 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。