产品货号：
MQ0179
中文名称：
EPI300化学感受态细胞
英文名称：
EPI300 Chemically Competent Cell
产品规格：
10×100μl|50×100μl
发货周期：
1～3天
产品价格：
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EPI300细胞含有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁，诱导剂I可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂I，ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。[mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (例如：哺乳动物基因组DNA)。recAl和endAl的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔMl5标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。EPI300感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达3×108cfu/μg DNA。
基因型：
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG trfA dhfr
保存：-80℃
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基因型：
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG trfA dhfr
| 组分 | 规格 |
| EPI300化学感受态细胞 | 10×100μL |
保存：-80℃
- EPI300感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
- 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静登2分钟，晃动会降低转化效率。
- 向离心管中加入700 μ1不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
- 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μ1左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
- 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
- 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
- 混入目的DNA时，应轻柔操作。
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