悬浮细胞质粒DNA转染试剂

产品货号：

ME0009

中文名称：

悬浮细胞质粒DNA转染试剂

英文名称：

nFect^SP Plasmid DNA Transfection Reagent

产品规格：

0.1mL|0.5mL|1mL|1.5mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

本制品是在nFect贴壁细胞质粒DNA转染试剂的基础上进一步优化研发成功的专门用于悬浮细胞质粒DNA转染的试剂。nFect^SP Plasmid具有非常优异的转染性能，可高效转染多种悬浮细胞，转染效率在悬浮细胞中可高达85%以上（巨噬细胞、EGFP质粒）。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，nFect^SP Plasmid采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率不到10%。nFect^SP Plasmid使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。

产品特点：

优异的细胞转染性能：可高效转染多种悬浮细胞，转染效率可高达85%以上；
极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响，实验结果更为客观；
操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

产品组成：

组分	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
nFect^SP Plasmid	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
Trans buffer	4.5mL	22mL	44mL	66mL

保存：2～8℃，避光，有效期1年。

注意事项：

对于24孔板，转染前接种细胞量以(2～4)×10⁵细胞为宜，转染时细胞生长状态应保持良好，不要有支原体污染。首次转染，建议进行细胞密度优化实验，如24孔板，首次可将细胞接种3个孔，每孔接种细胞数分别为2×10⁵、3×10⁵、4×10⁵，次日质粒转染，转染24小时后观察转染效果，选择转染阳性率较高的细胞接种数进行后续实验。
请确认待转质粒中无宿主菌DNA和RNA污染，请务必用电泳检查确认，转染所用培养基中尽量不要使用抗生素（非常重要）。
为了提高转染效率，转染后培养板可放于微型振荡器上培养或每隔1小时人工振荡1次（非常重要）。
转染试剂使用前请务必用移液器轻轻吹打混匀。
悬浮细胞转染难度大，且受细胞种类、细胞密度、细胞生长情况、培养方法、操作手法等因素的影响，研究者在转染之前，应查阅相关文献，认真准备转染方案。
本试剂主要用于质粒DNA转染，如需质粒DNA、RNA、siRNA均可转染的试剂，请选择nFect Prime悬浮细胞核酸转染试剂。

使用方法：
以24孔板转染为例：

细胞接种：
- 转染前一天或者两天接种细胞，接种细胞量为2～4×10⁵个；
- 确保转染时细胞比活度为90%以上，且生长状态良好；
- 如果细胞在转染前一天铺板，转染时可以不用换液，如果细胞在转染前两天铺板，转染时最好换液。
nFect^SP/DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染)：
- 在1.5mL无菌离心管中加入50μL Trans buffer，并添加适量的DNA（参见附表），用移液器轻轻混匀成DNA稀释液。
- 使用前用移液器吹打混匀转染试剂，立即往DNA稀释液中加入适量的转染试剂，用移液器轻轻混匀。
- 将nFect^SP/DNA复合物室温静置15分钟后，立即转染。
  请确认待转质粒中无宿主菌DNA和RNA污染，请务必用电泳检查确认，所用离心管最好使用聚丙烯离心管。
转染：
- 将拟转染细胞强烈振荡20～40秒，确保培养细胞分散成单细胞悬液，无细胞结团；
- 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
- 培养24～96小时后收获。
- nFect在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。因收获蛋白需要，可以使用悬浮细胞培养专用的无血清培养基。

附录参考：
附表：不同培养体系推荐初始转染条件

培养皿	96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板	10cm皿
表面积(cm²)	0.35	1.0	1.9	3.8	9.6	59
Trans buffer(μL)	10	25	50	100	200	1000
nFect^SP(μL)	0.25	0.6	1.2	2.4	4.8	24
1μg/μL plasmid (μL)	0.16	0.4	0.8	1.6	3.2	16
完全培养基(mL)	0.10	0.25	0.50	1.0	2.0	10

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