LipFect5000脂质体转染试剂

产品货号：

ME0008

中文名称：

LipFect5000脂质体转染试剂

英文名称：

LipFect5000 Plasmid transfection reagent

产品规格：

0.5mL|1mL|1.5mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

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LipFect5000是一款通用型核酸转染试剂，适用于将质粒DNA转染入哺乳动物细胞。LipFect5000具有非常优异的转染性能，可转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞。在贴壁培养的Hela细胞中，LipFect5000质粒DNA（EGFP质粒）的转染阳性率可高达70%以上。特别地，对于血管内皮细胞，LipFect5000具有更加优异的转染性能，转染阳性率可高达85%以上。LipFect5000具有特别显著的性价比优势，在拥有较高转染阳性率的同时，价格也非常优惠，特别适合于一般的质粒转染实验。对质粒转染要求较高的研究者，建议选用nFect质粒DNA转染试剂；如需质粒DNA、RNA、siRNA均可转染的试剂，请选择nFect Prime核酸转染试剂。

可高效转染多种贴壁细胞和部分悬浮细胞等，在贴壁细胞中的转染阳性率可高达70%以上。
特别适合于血管内皮细胞的质粒转染，转染阳性率可高达85%以上；
显著的性价比优势，转染性能显著优于PEI，是目前价格较低的脂质体类质粒转染试剂。

图．1.2μL LipFect5000转染0.8μg EGFP质粒于Hela细胞，24h

产品组成

组分	0.5mL	1mL	1.5mL
LipFect5000脂质体转染试剂	0.5mL	1mL	1.5mL
溶液A	1.1mL	2.2mL	3.3mL
说明书	1份

保存：2～8℃，有效期1年。

注意事项

每次使用前请先将本品轻轻混匀。
首次使用，建议在附表提供的DNA和转染试剂参考量的基础上进行优化实验，以摸索两者之间的最优搭配比例。如24孔培养板，每孔质粒用量0.8μg，转染试剂用量可选择1.0μL、1.2μL、1.4μL进行优化。
转染复合物必须在无血清培养基中制备，因为血清会干扰转染试剂与DNA形成复合物，在转染过程中不要向培养基中添加抗生素。
可在转染开始之前给细胞更换新鲜的培养基，以防转染后细胞密度过大导致的营养不良。加入转染试剂后，贴壁细胞可以在含血清培养基中进行培养，若转染效果不佳可尝试在转染前将细胞培养基更换为无血清培基，并在转染6～24小时以后将培养基更换为含血清培养基。

贴壁细胞转染方法步骤（以24孔板转染质粒DNA为例）：

细胞接种：
- 转染前一天将细胞铺板（使用不含抗生素的完全培养基），每孔2.0×10⁵个细胞左右，使转染时细胞密度为90%；
- 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
LipFect5000/DNA复合物包装（该步完成后应立即进行转染）：
- 使用前混匀转染试剂，在1.5mL无菌离心管A中加入50μL无血清培养基，并添加适量的转染试剂（参见附表）。用移液器轻轻混匀后在室温静置5～10分钟。
- 在1.5mL无菌离心管B中加入50μL无血清培养基，并添加适量的DNA，用移液器轻轻混匀后在室温静置5～10分钟。
- 将DNA-培养基混合物滴加至LipFect5000-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15～20分钟后，立即转染。
  注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
转染：
- 将步骤B制备的复合物滴加至细胞培养孔中。轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。
- 转染4小时后，向培养孔中加入适量的溶液A，轻轻晃动培养板，使溶液A与培养基混匀，具体见下表。
- 培养24小时后即可观察，但最佳观察时间为36～48小时。如果需要，细胞培养6～24小时后可以更换新鲜完全培养基，但不是必须。
- 收获细胞，进行后续实验。对于稳定转染，在转染24～48小时后，用选择培养基传代培养。

一、贴壁细胞培养体系推荐初始转染条件

培养皿		96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板	10cm皿
表面积(cm2)		0.35	1.0	1.9	3.8	9.6	59
复合物包装培养基、试剂、DNA量	无血清培养基(μl)	2×10	2×25	2×50	2×100	2×200	2×1000
	LipFect5000 (μl)	0.25	0.5	1.2	2.4	4.8	24
	1μg/μl plasmid (μl)	0.15	0.3	0.8	1.5	3	15
溶液A (μl)		0.45	1.2	2.5	5.0	10	50
完全培养基(ml)		0.1	0.25	0.5	1	2	10

二、适用细胞系：
HeLa，Huh-7，CCD-14Br，SBC-1，A-172，NB-1，COS-7，293T，CV1，L cell，A431，NIH 3T3，HEK293，CHO，KB，L929，A375M，ECV304，HepG2，BL6，panc-1，LTK-，C6，HOS，B16-F10，HT29，A549，MCF-7，MaTu，F98，CC531，Jurkat，K-562，U937，IM-9，HUVEC，HUVSMC，HASMC，HAEC，A-10 SMC，人肝细胞，原代大鼠肝细胞，鸡胚胎心肌细胞，Pc12，果蝇Kc细胞，CEM，F9，S194，HEL，A6，JEG等。
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