产品货号:
GS0281
中文名称:
高效脂质体转染试剂
英文名称:
HgLipo transfection reagent
产品规格:
0.5mL|1mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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HgLipo脂质体高效转染试剂是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞,具有低细胞毒性;对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率;转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
组分 | 0.5mL | 1mL |
HgLipo高效脂质体转染试剂 | 0.5mL | 1mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:2~8℃,切勿冷冻,有效期1年。
- 影响转染效率的因素有很多,如细胞类型、细胞状态及密度、DNA转染量、转染试剂与DNA比例等,应该在具体实践中优化来确定最佳转染条件。
- 细胞:为了取得较高的转染效率,推荐使用在50代以内的细胞进行转染。
- DNA的质量:为了取得较高的转染效率,推荐使用高纯度的质粒,OD260/OD280≥1.8。
- 对大多数细胞来说,质粒DNA(μg)与HgLipo(μl)的比例为1:2~1:3。
- 准备细胞(24孔板为例):
- 贴壁细胞:转染前18~24小时,用500μL不含抗生素的培养基接种0.5~2×105个细胞于24孔板中,并将细胞培养板置于37℃,5% CO2培养箱培养,转染前细胞密度达到70~90%为理想状态(具体密度视细胞的不同可进行适当调整)。
- 悬浮细胞:在准备转染前,用500μL不含抗生素的培养基接种4~8×105个细胞即可。
- 贴壁细胞:转染前18~24小时,用500μL不含抗生素的培养基接种0.5~2×105个细胞于24孔板中,并将细胞培养板置于37℃,5% CO2培养箱培养,转染前细胞密度达到70~90%为理想状态(具体密度视细胞的不同可进行适当调整)。
- 准备转染工作液:
- 将0.8~1μg质粒DNA溶于50μL细胞培养基中,轻轻混匀,室温静置5min;
- 将2~3μL的HgLipo溶于50μL细胞培养基中,轻轻混匀,室温静置5min;
- 将上步含有HgLipo的培养基加入含有质粒DNA的培养基中,轻轻混匀,室温静置20min;
- 将0.8~1μg质粒DNA溶于50μL细胞培养基中,轻轻混匀,室温静置5min;
- 将上述转染混合液,逐滴滴入接种好的细胞中,轻轻混匀后置于37℃,5% CO2培养箱中进行培养;
- 4~8小时后,更换新鲜培养基继续培养;
- 转染24~48小时后,观察或收取细胞。如果筛选稳定细胞株,则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中,S第二天加入选择培养基筛选。
图1.pEGFP-N1质粒转染Hela细胞。转染前一天将Hela细胞接种于24孔板中,105个细胞/孔;转染前将细胞培养基换成无血清培养基,按HgLipo (μl):DNA (μg)= 3:1进行转染;转染4小时后更换培养基为含有血清的新鲜培养基,24小时后,奥林巴斯IX73荧光倒置显微镜(Olympus)下观察。
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及HgLipo用量
细胞培养板 | 每孔面积 | 培养基用量 | DNA转染 | siRNA | |||
铺板培养基用量 | 稀释培养基用量 | ||||||
96-well | 0.3cm2 | 100μL | 2×25μL | 0.2μg | 0.5μL | 5pmol | 0.25μL |
24-well | 2cm2 | 500μL | 2×50μL | 0.8μg | 2.0μL | 20pmol | 1.0μL |
12-well | 4cm2 | 1mL | 2×100μL | 1.6μg | 4.0μL | 40pmol | 2.0μL |
6-well | 10cm2 | 2mL | 2×250μL | 4.0μg | 10μL | 100pmol | 5μL |
60-mm | 20cm2 | 5mL | 2×0.5mL | 8.0μg | 20μL | 200pmol | 10μL |
10-cm | 60cm2 | 15mL | 2×1.5mL | 24μg | 60μL | 600pmol | 30μL |
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