产品货号：
GL2523
中文名称：
DEAE-Dextran细胞转染试剂盒
英文名称：
DEAE-Dextran Cell Transfection Kit
产品规格：
100T|200T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒适用于瞬时转染(transient tranfection)，不宜用于筛选稳定表达细胞株，这是因为DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性。氯喹的加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解，从而提高转染效率。但对于具体的细胞、具体的培养条件，如需获得更加理想的转染效率，须自行摸索上述各种转染方法，找出优化的转染方法。CHO、DUKX、BⅡ等细胞也可以通过甘油、DMSO进行热休克处理以提高转染效率。
外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖(Dextran)转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。DEAE-葡聚糖转染法的原理是带正电荷的DEAE-葡聚糖不带负电的核酸的磷酸骨架相互作用，形成复合物，该复合物通过细胞内吞噬作用使DNA转导进入细胞核。
| 组分 | 100T | 200T | 保存 |
| 试剂(A):DEAE-Dextran solution | 10mL | 20mL | -20℃ |
| 试剂(B):TBS-D buffer | 500mL | 2×500mL | 4℃ |
| 试剂(C):Chloroquine solution | 1.8mL | 3.5mL | 4℃ |
保存：-20℃，有效期6个月。
- 胰蛋白酶消化液
- 完全培养基
- PBS、无菌水
- 注意无菌操作，尽量避免污染，同时DNA不应含有蛋白和酚。
- 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
- 转染12～24h后，可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。
- 如果转染效率低下，有可能是过多细胞死亡所致，应考虑减少DEAE-Dextran的用量或作用时间，或者减少氯喹作用时间。
- 支原体污染细胞，易导致转染不稳定。
- 常规转染：
- 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达50～70%即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
- 弃培养液，用PBS清洗细胞2次，再用TBS-D buffer清洗1次，吸尽残液。
- 配制转染液:对于6孔板，按照下表依次加入8μL DEAE-Dextran，2μL DNA以及适量的TBS-D，使其总体积为170μL，即为DEAE-Dextran-DNA-TBS-D转染液，用移液器轻轻吹打混匀，但不宜采用离心或Vortex等剧烈方式。
成分 6孔板 24孔板 60mm培养皿 100mm培养皿 DEAE-Dextran (162-x)μl (40-x)μl (325-x)μl (540-x)μl DNA xμl(2μg) xμl(0.5μg) xμl(4μg) xμl(7μg) TBS-D 8μL 2μL 17μL 28μL 总体积 170μL 42μL 342μL 568μL 细胞培养液 1.7mL 0.4mL 3.5mL 6mL Chloroquine(可选) 17μL 4μL 35μL 60μL
备注：对亍六孔板中一个孔的细胞，DNA可以在1～3μg的范围内进行适当调节。最佳的转染条件，因具体的细胞和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。对亍其它培养板或培养器皿，试剂的用量可大致按照细胞培养面积按比例换算。 - 转染：把170μL转染液滴加到细胞表面，轻轻晃动6孔板，使其不细胞表面充分接触，37℃孵育20～40min，观察细胞至皱缩变圆为止。
- 参考上表，每孔缓慢加入1.7mL细胞培养液(约DEAE-Dextran-DNA-TBS-D转染液体积的10倍)。
- 可选步骤：参考上表，每孔加入17μL Chloroquine solution，亦可和上一步骤中1.7mL细胞培养液预先混合后一起加入。
- 培养不超过2h或在出现明显的细胞毒性前，更换新鲜培养液继续培养，通常转染后48～72小时可以检测转染效果。
- 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达50～70%即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
- 预处理转染：
- 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达50～70%即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
- 弃培养液，用PBS清洗细胞2次，再用TBS-D buffer清洗1次，吸尽残液。
- 配制转染液:对于6孔板，按照下表依次加入0.1mL DEAE-Dextran、0.9mL PBS，使其总体积为1mL，即为DEAE-Dextran工作液。
- 预转染：对于6孔板，把1mL转染液滴加到细胞表面，轻轻晃动6孔板，使其不细胞表面充分接触，37℃孵育10min。
- 洗涤：弃液，用TBS-D buffer轻轻清洗1次，PBS轻轻清洗1次，注意防止细胞脱落。
- 弃洗涤液，参考下表，每孔缓慢均匀加入162μDNA工作液。
- 37℃孵育30min，参考下表，每孔缓慢加入1.7mL细胞培养液(约DNA工作液体积的10倍)。
成分 6孔板 24孔板 60mm培养皿 100mm培养皿 DEAE-Dextran 0.1mL 25μL 0.2mL 0.4mL PBS 0.9mL 225μL 1.8mL 3.6mL DEAE-Dextran工作液 1mL 250μL 2mL 4mL DNA xμl(2μg) xμl(0.5μg) xμl(4μg) xμl(7μg) PBS (162-x)μl (40-x)μl (325-x)μl (540-x)μl DNA工作液 162μL 40μL 325μL 540μL 细胞培养液 1.7mL 0.4mL 3.5mL 6mL Chloroquine(可选) 17μL 4μL 35μL 60μL
备注：对亍六孔板中一个孔的细胞，DNA可以在1～3μg的范围内进行适当调节。最佳的转染条件，因具体的细胞和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。对亍其它培养板或培养器皿，试剂的用量可大致按照细胞培养面积按比例换算。 - 可选步骤：参考上表，每孔加入17μL Chloroquine solution，亦可和上一步骤中1.7mL细胞培养液预先混合后一起加入。
- 培养不超过4h或在出现明显的细胞毒性前，更换新鲜培养液继续培养，通常转染后48～72小时可以检测转染效果。
- 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达50～70%即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
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