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本试剂盒通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化。适用于酿酒酵母S.cerevisiae，也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括S.pombe、C.albicans、Pichia pastoris等。制备的化学感受态细胞可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。

• 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟。
  
• 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母（如双杂交体系中的酵母）。
  
• 对酿酒酵母，最高转化效率可达到0.2～1×10⁵个转化子/ug质粒DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在100～2000个转化子/ug质粒DNA。
  
• 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp,YRp,YCp,YEp和YAC等。
  
• 本制品可以制备20只酵母感受态细胞（需要200mL酵母培养液），并还带高效转化液。

1. 挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在50mL离心管中的10mL的自备的YPD培养基中。
   
   • 按本方法制备1管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6～1.0的新鲜酵母培养液10mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10mL，则制备液的使用量需要按比例增加。
2. 30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到0.6～1.0（相当于0.6～1×10⁷细胞/mL）。
   
3. 室温3000rpm离心5min，弃上清得酵母细胞沉淀。
   
4. 新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10mL酵母需要5.25mL的工作液，其配制方法是：将4.75mL制备液A、0.25mL制备液B和0.25mL制备液C加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
   
5. 用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次（对10mL酵母则需要5mL酵母感受态制备工作液）。即混合后振荡1分钟，室温3000rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
   
6. 再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体（对10mL酵母，则需要0.2mL酵母感受态制备工作液）。
   
7. 按每管0.2mL分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2mL的感受态细胞足够1次转化使用。
   
   • 放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。

8. 将总体积不超过20μL的0.1～5μg质粒DNA加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的0.2mL酵母感受态细胞上。
   
   • 最好同时做一个不加质粒DNA的阴性对照组。
9. 室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。
   
   • 此步非常关键，如果能在恒温振荡器上37℃振荡5分钟，则效果更好。
10. 加入1.4mL转化液A，轻柔颠倒混匀一分钟。
    
11. 30℃培养1小时。
    
12. 室温3000g离心5分钟，弃上清。
    
13. 在酵母细胞沉淀中加1.0mL转化液B，振荡一分钟。
    
14. 室温3000g离心5分钟，弃上清。
    
15. 在酵母沉淀细胞中加入适量（如100μL）的转化液B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。
    
16. 30℃培养3～5天后即得酵母转化菌落。