产品货号：
BTN60603
中文名称：
即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)
英文名称：
Instant Blue-White Vector T，Type A
产品规格：
20次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分)，其两个末端的5′都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。
产品特点：
1.由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2.克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3.插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4.克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6.T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1复制起始子，可以制备单链DNA。
产品组成：
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。
使用方法：
一.PCR产物的纯化和定量
1.将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
2.在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二聚体的形成，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)。
3.用百奥莱博的柱式DNArc(BTN60202)纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4.将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或绿如蓝染料(BTN70303)的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意：一般不推荐使用测OD260的方法，因为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。
5.如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂(BTN110801)将其浓缩到需要的浓度。
6.如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的连接反应。
二.连接反应
1.短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：
注：PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3-10，可以按下面的公式计算出连接反应中需要的PCR纯化产物的ng数:
假如插入片段和载体的连接比例设定为3，连接反应中加入蓝白T载体(长度为3Kb)的量为40ng，则需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是:
3.用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的说明书进行连接)。
三.细菌转化
1.将100μL感受态细胞于冰上解冻。注意：最好使用转化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受态细胞进行转化，因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。
2.取5μL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3.将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中。
相关搜索：即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)，Instant Blue-White Vector T，Type A
产品特点：
1.由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2.克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3.插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4.克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6.T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1复制起始子，可以制备单链DNA。
产品组成：
| 成分 | 规格 |
| 即用型蓝白T载体(40ng/uL) | 20μL |
| 阳性对照(40ng/uL) | 5μL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。
使用方法：
一.PCR产物的纯化和定量
1.将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
2.在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二聚体的形成，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)。
3.用百奥莱博的柱式DNArc(BTN60202)纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4.将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或绿如蓝染料(BTN70303)的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意：一般不推荐使用测OD260的方法，因为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。
5.如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂(BTN110801)将其浓缩到需要的浓度。
6.如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的连接反应。
二.连接反应
1.短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：
| 成分 | 样品管 | 负对照 | 正对照 |
| 自备T4 Ligase Buffer，10× | 1μL | 1μL | 1μL |
| 蓝白T载体(40ng/uL) | 1μL | 1μL | 1μL |
| 自备PCR纯化产物 | 见下注 | 不加 | 不加 |
| 阳性对照(40ng/uL) | 不加 | 不加 | 1μL |
| 自备T4 Ligase(5～10U/μL) | 1μL | 1μL | 1μL |
| 补超纯水到 | 10μL | 10μL | 10μL |
注：PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3-10，可以按下面的公式计算出连接反应中需要的PCR纯化产物的ng数:
假如插入片段和载体的连接比例设定为3，连接反应中加入蓝白T载体(长度为3Kb)的量为40ng，则需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是:
3.用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的说明书进行连接)。
三.细菌转化
1.将100μL感受态细胞于冰上解冻。注意：最好使用转化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受态细胞进行转化，因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。
2.取5μL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3.将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中。
相关搜索：即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)，Instant Blue-White Vector T，Type A