产品货号：
BTN130813
中文名称：
DNA磷酸化试剂盒
英文名称：
DNA Phosphorylation Kit
产品规格：
20次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5'端一般都是羟基基团而不是磷酸基团（除非额外付费要求在人工合成时加上磷酸基团），而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5'端的羟基基团和另一个DNA分子3'端的羟基基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA之间的连接效率一般都比天然DNA彼此的连接效率低（天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接），尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA磷酸化产品能将DNA分子5'端的羟基基团磷酸化。
- 可快速把DNA 5'端的羟基基团变成磷酸基团，使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA有一样高的连接效率。
- 既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
- 处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
- 本制品足够20次DNA的磷酸化实验。
- 本试剂盒只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| DNA磷酸化Mix | 40μL |
| 10mM ATP溶液 | 100μL |
| 超纯水 | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
一、双链DNA片段的磷酸化
- 如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中残留的大量的PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
- 在1.5mL离心管中配制下列反应液：
成分 用量 PCR胶回收片段 2μL(不超过10pmol) DNA磷酸化Mix 2μL 10mM ATP溶液 5μL 超纯水 至20μL - 37℃反应30分钟。
- 70℃热处理5分钟灭活T4多核苷酸激酶。
- 可不经过纯化直接用于后续克隆，但加入量不要超过连接反应总体积的1/5。
二、单链DNA片段的磷酸化
- 单链DNA包括局部双链的DNA、引物，linker，adaptor，Oligo探针等。
- 在1.5mL离心管中配制下列反应液：
成分 用量 单链DNA片段 5～10pmol DNA磷酸化Mix 2μL 10mM ATP溶液 1μL 超纯水 至20μL - 37℃反应30分钟。
- 70℃热处理5分钟灭活T4多核苷酸激酶。
- 可不经过纯化直接用于后续克隆，但加入量不要超过连接反应总体积的1/5。
如果需要提高磷酸化DNA的浓度，可用乙醇沉淀法浓缩DNA（见附录参考）。DNA的浓度低于5pmol，在乙醇沉淀时还需要加入DNA助沉剂（需要另行购买）。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中以便得到所需的浓度。
乙醇沉淀浓缩DNA
本试剂盒不提供相关试剂，下列操作流程仅供参考：
- 在DNA溶液中加入0.1倍体积的3M乙酸钠溶液（pH5.2），100μL DNA溶液加10μL乙酸钠溶液。
- 再加入2.5倍体积的无水乙醇。100μL DNA溶液加250μL无水乙醇。
- 混匀后12000g常温离心10分钟，小心弃上清。
- 加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
- 短暂离心5秒，吸弃残留液体（约30～50μL）。
- 室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存
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