产品货号:
ALH353
中文名称:
DNA快速连接试剂盒
英文名称:
DNA Quick Ligation Kit
产品规格:
20T|60T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒可在室温(22℃) 10分钟条件下,迅速完成DNA片段粘端或平端连接反应。连接产物可直接转化。可用于DNA片段克隆、文库构建、TA克隆、Linker连接等。
组分 | 20T | 60T |
2×Quick Ligation Buffer | 100μL | 300μL |
T4 DNA ligase(5U/μL) | 20μL | 60μL |
保存:-20℃,避免反复冻融。
- 反应按以下体系进行:
成分 用量 2×Quick Ligation Buffer 5μL Vector DNA 30~60ng Insert DNA 插入和载体摩尔比为3:1 无菌水 至9μL T4 DNA Ligase(5U/μL) 1μL - 一般最后加入T4 DNA Ligase,充分混匀,可瞬间离心收集液体至管底。
- DNA片段体积大于4μL的,可增加2×Quick Ligation Buffer,总反应体积相应可以增至20μL,这样在连接体系中可加入更大体积的DNA片段。
- 22℃连接10分钟(一般可在PCR仪器完成)。
- 通常推荐22℃连接5~10分钟,>3kb长片段连接可以延长至30分钟。不推荐超过30分钟,超过可能降低转化子数量。
- 冰上冷却,然后直接转化或贮存于-20℃。
- 如储存于-20℃,转化前应该置冰上重新溶解,充分混匀后进行转化。
- 转化前不要热灭活T4 DNA ligase,否则将降低转化效率。
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