鸡脾脏淋巴细胞分离液

产品货号：

JH0344

中文名称：

鸡脾脏淋巴细胞分离液

英文名称：

Chicken spleen lymphocyte separation solution

产品规格：

200mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

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产品组成：

保存：常温保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

实验前准备：

组织样本的制备：

取组织块称重后，用眼科剪刀无菌操作，将脾脏剪成小块。
将组织块放在70μm细胞筛网（货号：JH0805，随试剂盒附赠5个）上，用研磨器反复研磨，边研磨边加入匀浆冲洗液（以0.1g组织为例，约加5～8mL），使细胞全部通过筛网滴到离心管中。
弃去筛网，组织研磨液经450g，离心10min，弃上清。
用样本稀释液重悬组织细胞，将细胞悬液细胞浓度调整为2×10⁸～1×10⁹/ml（以0.1g组织为例，约使用1mL样本稀释液重悬细胞），备用。

实验方法：
全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行

取一支适当离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液。
注：分离液最少不得少于4mL。
用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上，400～500g，离心20～30min。
注：根据脾脏组织单细胞悬液量确定离心条件，脾脏组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。
离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层（含少量红细胞）。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中，向离心管中加入5～10mL洗涤液（0.1g脾脏组织约加5mL洗涤液），混匀细胞。
400g，离心10min。
弃上清。
用吸管以5mL清洗液重悬所得细胞。
250g，离心10min。
重复7、8、9，弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。

分离图例：

注意事项：

全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。
分离液用量大于脾脏组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。

参考值：
本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于80%。

可能存在的问题及解决方法：

由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以50～100g为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于400g，最大不得大于1200g。离心时间以20～30min为准。
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