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本试剂盒基于LAMP技术，用于定性检测样品中的非洲猪瘟病毒，检测灵敏度为10个拷贝，本试剂盒主要组分为冻干制品，可常温运输不影响试剂盒性能。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。本试剂盒为冻干制品，相对于液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30min内完成检测。

本试剂盒配有橙绿变色染料OTG，以冻干的形式预加在8联管盖上。在LAMP反应完毕后（在反应完毕前，务必不能将管盖上染料混入反应液中），将0.2ml EP管颠倒溶解OTG染料后。LAMP的反应产物将与OTG染料形成强烈的绿色肉眼可见变色反应（阳性），而未发生扩增的EP管为深橙色（阴性）。

试剂盒组成：

组分	规格(48T)
LAMP OTG Reagent	1瓶
LAMP Buffer	0.75ml
0.2ml EP管	48支
含冻干OTG染料EP管盖	48支
ASFV LAMP Primer	1支
ddH2O	1mL
ASFV阳性标准品（105 Copy/μl）	1支

保存条件：-20℃

使用方法：

• LAMP OTG Reagent为干粉形式，包含Bst DNA聚合酶4.0、dNTP等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75ml的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
• OTG染料已经预先加入在EP管盖上，为干粉形式，其牢固的结合在管盖上，仅有反应完毕后，将EP管倒置后才能将其溶解，溶解后其将立即终止LAMP反应，并与LAMP反应产物形成鲜亮的绿色可见光。在配制反应液和反应过程中务必不能将EP管盖上的染料混入反应液中，否则会导致LAMP反应终止。
• ASFV LAMP Primer为干粉形式，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.2ml的ddH2O溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
• 阳性标准品为干粉形式，首次使用前加入100μl的ddH2O，漩涡10s溶解后，保存于-20℃。溶解后的制品浓度为105copy/μl，每次实验时采用1μl即可。
• 配制反应体系
  在本试剂盒提供的0.2ml EP反应管中加入下述试剂
  

  成分	用量
  溶解后的LAMP OTG Reagent	15μL
  溶解后的ASFV LAMP Primer	4μL
  模板DNA	1μL

  
  全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上含OTG染料的EP管盖（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应）。
• 反应体系配好后，置于60℃反应25min。
• 观察结果：观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。将反应EP管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡EP管盖上的OTG染料，静置30s。再将EP反应管正置，并轻甩反应液到EP管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。（在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染）。一旦发生气溶胶污染，请使用我公司的DNA污染去除剂（货号：MT3001）进行
  环境清理。
• 结果判读
  
  • 结果判读成立条件
    阴性水对照为深橙色、阳性标准品变为鲜艳的绿色条件下，结果判读有效。
  • 阳性结果判读
    阳性样品为鲜艳的绿色。
  • 阴性结果判读
    阴性样品为深橙色。
    该试剂盒稳定的检测灵敏度为5 copy。

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