产品货号：
BTN15-18510
中文名称：
莫氏立克次氏体荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Rickettsia mooseri qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本公司开发了简单快捷的莫氏立克次体探针法荧光定量PCR检测试剂盒。
地方性斑疹伤寒亦称蚤型或鼠型斑疹伤寒，由莫氏立克次体以鼠蚤为媒介而地方性斑疹伤寒亦称蚤型或鼠型斑疹伤寒，由莫氏立克次体以鼠蚤为媒介而引起的急性传染病。莫氏立克次体接种雄性豚鼠腹腔后，豚鼠除发热外，阴囊高度水肿，称之为豚鼠阴囊现象。莫氏立克次体在睾丸鞘膜的浆细胞中繁殖甚多，其鞘膜渗出液涂片可查见大量立克次体。莫氏立克次体可引起大白鼠发热或致死，并在其脑内存活数月，故可用之保存菌种或传代；接种于小白鼠腹腔内可引起致死性腹膜炎及败血症。因此对莫氏立克次体进行快速灵敏的诊断具有重要的意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：莫氏立克次氏体荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Rickettsia mooseri qPCR Kit(Probe Method)
地方性斑疹伤寒亦称蚤型或鼠型斑疹伤寒，由莫氏立克次体以鼠蚤为媒介而地方性斑疹伤寒亦称蚤型或鼠型斑疹伤寒，由莫氏立克次体以鼠蚤为媒介而引起的急性传染病。莫氏立克次体接种雄性豚鼠腹腔后，豚鼠除发热外，阴囊高度水肿，称之为豚鼠阴囊现象。莫氏立克次体在睾丸鞘膜的浆细胞中繁殖甚多，其鞘膜渗出液涂片可查见大量立克次体。莫氏立克次体可引起大白鼠发热或致死，并在其脑内存活数月，故可用之保存菌种或传代；接种于小白鼠腹腔内可引起致死性腹膜炎及败血症。因此对莫氏立克次体进行快速灵敏的诊断具有重要的意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 根据莫氏立克次体保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的莫氏立克次体。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 本产品只能用于科研，足够50次20μL体系的荧光定量PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR Magic Mix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 莫氏立克次体探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 莫氏立克次体qPCR探针 | 50μL |
| 莫氏立克次体qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 莫氏立克次体qPCR探针 1μL 1μL 各1μL 莫氏立克次体探针法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL N+2个待测DNA模板 7μL - - 超纯水 - 7μL - 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) - - 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集FAM通道的荧光信号)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于32。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于32则为阳性。如果在32～40之间，则重复一次。若重复结果Ct值小于40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
相关搜索：莫氏立克次氏体荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Rickettsia mooseri qPCR Kit(Probe Method)