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鹦鹉热衣原体(Chlamydia Psittaci，Cps)是衣原体科嗜衣原体属成员之一，是一种多宿主、人畜共患的病原微生物，能感染包括人在内的灵长类动物、家养和野生哺乳动物、禽类及两栖动物。Cps感染家禽、宠物鸟和野鸟后，引起肺炎、呼吸困难等症状，严重的可导致死亡，有的还能呈隐性感染状态。家畜(包括猪、牛、兔和羊等)感染后主要表现流产、肺炎、肠炎、多关节炎、尿道炎等多症候群疾病。近年发现Cps还可感染马属动物，引起流产、呼吸道等疾病。人亦可感染而引起为肺炎、败血症和流产等，病畜禽和带毒动物是本病的主要传染源，因此快速检测鹦鹉热嗜衣原体具有重要的意义。

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
   
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
   
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
   
4. 特异性高，引物是根据鹦鹉热嗜衣原体DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
   
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
   
6. 本制品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
   
7. 本制品只能用于科研。

1. 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
   
2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
   
3. 在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
   
4. 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10⁶拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10⁵拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
   
5. 换枪头，在4号管中加入5μL 1×10⁵拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10⁴拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
   
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

7. 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
   
8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
   
10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
    

    成分	样品管 N+2个	PCR阴性 对照	标准曲线样品管 (1～6管)
    2×Probe qPCR MasterMix	各10μL	10μL	各10μL
    鹦鹉热嗜衣原体qPCR引物-探针混合液	各3μL	3μL	各3μL
    N+2个待测DNA样本	各7μL	不加	不加
    超纯水	不加	7μL	不加
    第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号)	不加	不加	各7μL

11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
    

    过程	温度	时间
    预变性	95℃	10min
    PCR反应 (45个循环)	95℃	15sec
    	60℃	60sec(采集FAM通道的荧光信号， 设置TAMRA为淬灭基团)

12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
    
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果Ct小于40则为阳性。