产品货号：
YTB1068
中文名称：
黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒
英文名称：
Xanthine Oxidase Activity Assay Kit
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
背景资料：
检测原理：
图1．黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒检测原理图。底物(Substrate)在XO催化作用下产生的超氧化物阴离子(O2•−)，随后与WST类指示剂反应产生水溶性的Formazan染料。Formazan在450nm左右有最大吸收峰，甲臜染料的生成量与黄嘌呤氧化酶的活性成正比，通过测定450nm处的吸光度就可以非常灵敏地检测样品中黄嘌呤氧化酶活性。
产品特点：
产品应用：
产品组成：
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
使用方法：
应用效果：
图2.黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒对黄嘌呤氧化酶标准品及小鼠不同组织样品的检测效果图。左图为黄嘌呤氧化酶的标准曲线图，各浓度的黄嘌呤氧化酶标准品和Chromogen工作液混匀后，37℃反应30分钟，测定A450，在0.2-30mU/ml活性范围内有良好的线性关系。右图为10mU/ml黄嘌呤氧化酶、320μg蛋白量的小鼠肝脏(Mouse liver)裂解样品、125μg蛋白量的小鼠肌肉(Mouse muscle)裂解样品加入Chromogen工作液并匀混后，在37℃反应30分钟内的吸光度信号变化图。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
相关搜索：黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒，XOD检测，黄嘌呤氧化酶检测，Xanthine Oxidase Activity Assay Kit
本制品是一种基于WST-8的显色反应，利用吸光度检测，简单、快速、灵敏地用于血清、血浆、尿液等生物体液、组织、细胞以及细胞培养上清等样品中黄嘌呤氧化酶活性检测的试剂盒。通常0.2～1μL血清或血浆样品就足够用于本试剂盒的检测。
背景资料：
黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XO,XOD)是体内核酸代谢中的一种重要酶，可以催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤，并能进一步催化黄嘌呤氧化为尿酸，同时产生过氧化氢以及超氧化物阴离子的一系列氧化反应，在包括人类在内的一些物种中的嘌呤分解代谢中起着重要作用。在人类及其它灵长类动物中，XO通常存在于血清、肺、肝脏和肠黏膜中。在啮齿类动物中，XO在大部分组织中均有表达。血液中XO的活性通常都很低。当感染甲型流感时，血清及肺部的XO活性会增加。当肝功能受损时，XO会大量释放到血液中，因此检测血液中XO水平被作为一个评估严重肝损伤(例如黄疸)的灵敏指标。
检测原理：
图1．黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒检测原理图。底物(Substrate)在XO催化作用下产生的超氧化物阴离子(O2•−)，随后与WST类指示剂反应产生水溶性的Formazan染料。Formazan在450nm左右有最大吸收峰，甲臜染料的生成量与黄嘌呤氧化酶的活性成正比，通过测定450nm处的吸光度就可以非常灵敏地检测样品中黄嘌呤氧化酶活性。
产品特点：
- 本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒在样品体积为20μL时，可以检测活性低至4μU的黄嘌呤氧化酶，在0.2-30mU/mL(4～600μU)活性范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了配制黄嘌呤氧化酶标准溶液的XO (2U/mL)，可以通过绘制标准曲线，从而计算出样品中的黄嘌呤氧化酶的活性。如果样品量较少或者样品中黄嘌呤氧化酶的活性较低，可以使用检测灵敏度更高的黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒（Amplex Red法）。
- 本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BalbLysis Buffer A裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于百奥莱博的其它代谢类试剂盒中同样使用BalbLysis Buffer A进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。
产品应用：
本试剂盒使用灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、尿液等生物体液，细胞培养上清、组织或细胞样品等的检测，全程约0.5～1小时即可完成。本试剂盒不仅适合少量样品的检测，也非常适合高通量筛选的自动化操作系统。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| BalbLysis Buffer A | 30mL |
| XO Assay Buffer | 30mL |
| XO (2U/mL) | 25μL |
| XO Indicator (100×) | 100μL |
| XO Substrate | 150μL |
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
- BalbLysis Buffer A、XO Assay Buffer、XO Indicator需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。XO使用时应在冰上进行，使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒保存的条件进行保存。
- 血清等样品如在4℃保存，保存时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜-20℃保存，-80℃保存更佳。
- 为减少稀释液产生的背景带来的误差，样品和标准品的稀释液应该根据样品的种类来定。当样品为BalbLysis Buffer A制备的细胞或组织的裂解样品时，应使用BalbLysis Buffer A稀释；当样品为血液等其它样品时，应使用XO Assay Buffer稀释。
使用方法：
- 样品的准备：
- 血液样品的准备：对于血清样品，将全血在常温如25℃下放置30分钟至2小时，不要剧烈摇晃以免溶血，待全血自然凝固并析出血清后，4℃约1000～2000×g离心10分钟，取黄色上清即得血清，注意不要吸取白色或淡黄色沉淀；对于血浆样品，将全血用肝素或者EDTA进行抗凝，4℃约1000～2000×g离心10分钟，取黄色或淡黄色上清即得血浆，注意不要吸取白色沉淀。血清和血浆都需置于冰上，如果不能立即检测，也可以分装并短期保存于-20℃或-80℃。对于冻存的样品，在检测前解冻后冰浴存放备用，使用前必须混匀。
- 细胞或组织样品的准备：对于培养的贴壁细胞，PBS洗涤一次并吸净残留液体。对于培养的悬浮细胞，先适当离心(如100～500×g，5分钟)收集细胞到离心管内，弃上清并吸净残留液体。按照每100万细胞加入100～200μL BalbLysis Buffer A的比例加入裂解液，适当吹打，冰浴5～10分钟以充分裂解细胞。4℃约12000×g离心3～5分钟，取上清用于后续检测。对于组织样品，按照每10mg组织加入100μL BalbLysis Buffer A的比例，使用组织研磨仪或玻璃匀浆器在约4℃或冰浴等低温条件下进行匀浆。4℃约12000×g离心3～5分钟，取上清用于后续检测。以上所有操作均需在4℃或冰上操作。制备好的细胞或组织样品如果不能立即检测，可以-20℃或-80℃冻存。
- 细胞培养上清样品的准备：对于贴壁细胞，直接取培养液；对于悬浮细胞，离心取培养液。
- 血液样品的准备：对于血清样品，将全血在常温如25℃下放置30分钟至2小时，不要剧烈摇晃以免溶血，待全血自然凝固并析出血清后，4℃约1000～2000×g离心10分钟，取黄色上清即得血清，注意不要吸取白色或淡黄色沉淀；对于血浆样品，将全血用肝素或者EDTA进行抗凝，4℃约1000～2000×g离心10分钟，取黄色或淡黄色上清即得血浆，注意不要吸取白色沉淀。血清和血浆都需置于冰上，如果不能立即检测，也可以分装并短期保存于-20℃或-80℃。对于冻存的样品，在检测前解冻后冰浴存放备用，使用前必须混匀。
- 试剂盒的准备：
- 融解除XO以外的其它所有试剂并平衡至室温。XO置于冰浴备用，使用完毕后宜立即按照试剂盒要求的条件保存。
- Chromogen工作液的配制：按照每个样品需要80μL Chromogen工作液的量配制适量的Chromogen工作液。均匀混合77.5μL XO Assay Buffer、1μL XO Indicator (100×)、1.5μL XO Substrate，即可配制成80μL Chromogen工作液。具体配制方法参考下表。配制好的Chromogen工作液如果置于4℃或冰浴避光保存，可以在当天使用，但建议尽量现配现用。
成分(μL) 样本数 1 10 20 50 XO Assay Buffer 77.5 775 1550 3875 XO Indicator (100×) 1 10 20 50 XO Substrate 1.5 15 30 75 Chromogen工作液 80 800 1600 4000
- 融解除XO以外的其它所有试剂并平衡至室温。XO置于冰浴备用，使用完毕后宜立即按照试剂盒要求的条件保存。
- 样品测定：
- 黄嘌呤氧化酶标准曲线的设置：取3μL XO (2U/mL)，加入197μL XO BalbLysis Buffer A或XO Assay Buffer (如果检测BalbLysis Buffer A制备的细胞或组织裂解样品，使用BalbLysis Buffer A；如果检测血液、上清等无需处理的样品，使用XO Assay Buffer)，混匀，即得浓度为30mU/ml的XO。分别取30mU/ml的XO 1、2、4、8、12、16、20μL加入96孔板的标准品孔中，并用对应的BalbLysis Buffer A或XO Assay Buffer补足至20μL，此时标准曲线的浓度为0、1.5、3、6、12、18、24、30mU/ml。
- 取1～20μL稀释后的样品至96孔板样品孔中，并相应地再加入BalbLysis Buffer A或XO Assay Buffer至样品孔中，补足到20μL。同时设置仅含BalbLysis Buffer A或XO Assay Buffer的孔为空白对照孔。为确保数值在标准曲线范围内，建议将样品同时设定多个稀释倍数。可以进行预实验确定样品的大致浓度，如果数值不在标准曲线范围内，可调整样品的稀释倍数或者增加样品的用量。如果是BalbLysis Buffer A制备的细胞或组织裂解样品，使用BalbLysis Buffer A稀释；如果是血液、上清等无需处理的样品，使用XO Assay Buffer稀释。此处的样品总稀释倍数记为n (例如本步骤中对样品进行了10倍稀释，加入的“稀释后的样品”为10μL，则n=10×20/10=20)。
- 各孔加入Chromogen工作液80μL，混匀，37℃反应30分钟。
- 如果吸光度偏低，可适当延长反应时间。
- 在450nm测定吸光度。
- 建立标准曲线，并计算样品中黄嘌呤氧化酶的活性A。黄嘌呤氧化酶标准曲线可以参考图2，在0.2-30mU/ml活性范围内有良好的线性关系。黄嘌呤氧化酶酶活性计算公式如下：C(mU/mL)＝A×n
- A为步骤3e根据标准曲线确定的黄嘌呤氧化酶活性；n为步骤3b样品总稀释倍数。
- 黄嘌呤氧化酶酶活性单位的定义为：在室温条件下，每分钟催化黄嘌呤产生1.0μmol尿酸和过氧化氢所需的酶量。
- A为步骤3e根据标准曲线确定的黄嘌呤氧化酶活性；n为步骤3b样品总稀释倍数。
- 黄嘌呤氧化酶标准曲线的设置：取3μL XO (2U/mL)，加入197μL XO BalbLysis Buffer A或XO Assay Buffer (如果检测BalbLysis Buffer A制备的细胞或组织裂解样品，使用BalbLysis Buffer A；如果检测血液、上清等无需处理的样品，使用XO Assay Buffer)，混匀，即得浓度为30mU/ml的XO。分别取30mU/ml的XO 1、2、4、8、12、16、20μL加入96孔板的标准品孔中，并用对应的BalbLysis Buffer A或XO Assay Buffer补足至20μL，此时标准曲线的浓度为0、1.5、3、6、12、18、24、30mU/ml。
应用效果：
图2.黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒对黄嘌呤氧化酶标准品及小鼠不同组织样品的检测效果图。左图为黄嘌呤氧化酶的标准曲线图，各浓度的黄嘌呤氧化酶标准品和Chromogen工作液混匀后，37℃反应30分钟，测定A450，在0.2-30mU/ml活性范围内有良好的线性关系。右图为10mU/ml黄嘌呤氧化酶、320μg蛋白量的小鼠肝脏(Mouse liver)裂解样品、125μg蛋白量的小鼠肌肉(Mouse muscle)裂解样品加入Chromogen工作液并匀混后，在37℃反应30分钟内的吸光度信号变化图。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
相关搜索：黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒，XOD检测，黄嘌呤氧化酶检测，Xanthine Oxidase Activity Assay Kit