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本试剂盒可测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料等液体样本中的甘油含量。试剂盒经过优化使得操作简单，最低检测灵敏度10μmol/L，线性范围10~1200μmol/L，可靠性和重复性俱佳。适合生物医学、食品实验室检测。

在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢；在过氧化氢酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺，光密度值与甘油浓度成正比。


甘油是甘油三酯的水解产物。甘油三酯水解生成1分子甘油和3分子游离脂肪酸，称为脂肪分解。脂蛋白酯酶水解血中甘油三酯；胰脂酶水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，但检测更加方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法与经典GPO Trinder酶学反应，通过比色测定液体样品甘油含量。

组分	规格
试剂R1	40mL
试剂R2	10mL
4mM甘油标准品	1mL

保存：4℃，避光，有效期3个月。


本试剂盒可供300～500次微板测定或100次1mL比色杯测定。


酶标仪、可见光分光光度计（721、722型）、生化分析仪。
最佳工作波长550nm，如无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。


工作溶液的配制：
按试剂R1∶试剂R2= 4∶1比例，即取4mL试剂R1与1mL试剂R2混合，现用现配，用多少配多少。

• 样本处理
  
  • 酒精、饮品、清澈体液样本：直接测定，如超过线性范围用蒸馏水或生理盐水稀释后测定。
    
  • 培养液：取不含酚红无颜色无血清的细胞培养基液，如有细胞碎片应4℃条件下12000g离心5min清除，取上清测定。
    
  • 血液：新鲜抗凝血4℃ 2000g 5min得到血浆，或非抗凝血4℃ 2小时取血清。2000g离心10min除去血细胞。70℃ 10min灭活内源脂肪酶，再次12000g 10min，取上清测定或-20℃保存。
• 标准品稀释
  用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L，通常4～6管即可，注意设置0浓度对照反应管。
  
• 甘油测定
  
  • 参见下表加样。先加标准甘油或待测样品，后加工作溶液。甘油浓度很低时，可尝试样品与工作液体积100:100μL能否进一步增加灵敏度，但样品超过100μL将稀释酶浓度而降低灵敏度。超出线性范围可适当稀释，根据稀释倍数计算浓度。
    表1．酶标微板测定的加样比例（检测范围10～1200μmol/L，可微量调整样品与工作液体积比例）
    

    成分	培养基或低甘油浓度样品测定			高甘油浓度样品测定
    	空白管	标准管	测定管	空白管	标准管	测定管
    蒸馏水/生理盐水	50μL			5μL
    标准品		50μL			5μL
    样品			50μL			5μL
    工作溶液	150μL	150μL	150μL	195μL	195μL	195μL

    
    表2．1mL比色杯测定的加样比例（检测范围10～1200μmol/L）
    

    成分	培养基或低甘油浓度样品测定			高甘油浓度样品测定
    	空白管	标准管	测定管	空白管	标准管	测定管
    蒸馏水/生理盐水	200μL			50μL
    标准品		200μL			50μL
    样品			200μL			50μL
    工作溶液	600μL	600μL	600μL	750μL	750μL	750μL

    
    
  • 37℃ 20min(15～30min)。或25℃室温30min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60min内稳定。
    
  • 先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管OD值。
    
  • 绘制标准曲线并计算甘油浓度。

1、细胞培养须用不含酚红的无色无血清培养基。正常血清甘油浓度为20～130μmol/L。任何含血清培养基需彻底洗去。
2、试剂混浊或550nm处空白反应管吸光度大于0.2时弃去。
3、维生素C＞0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等干扰测试。
相关搜索：甘油含量测试盒(微量酶标法)，甘油含量测定试剂盒，甘油含量检测试剂盒，Glycerol Assay Kit