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羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4%，在弹性蛋白中占极少量，其它蛋白中均不存在。而胶原蛋白大多分布在皮肤、腱、软骨、血管等处，因此羟脯氨酸的量能反映结缔组织疾病的胶原代谢情况。

有人把皮肤中羟脯氨酸的测定作为筛选抗衰老药物的一个指标。在发育阶段随年龄的增长，其羟脯氨酸在尿中排泄增加，而发育停止后稳定。老年人的羟脯氨酸比年轻人要少。

鼠患有自发性高血压及继发性高血压时，尿中羟脯氨酸含量增加。

手术创伤会导致尿羟脯氨酸排泄量的增加，因高脂、低蛋白、酒精中毒及毒物、营养不良，或肝细胞变性坏死，通过炎症使纤维增加，分割肝小叶，导致肝硬化。肝纤维化时，肝内主要增加的成分为胶原纤维，羟脯氨酸为胶原纤维所特有，测定肝羟脯氨酸的含量，可换算成肝胶原蛋白的含量，以反映肝纤维化程度。胶原纤维分解主要依赖胶原酶和其它蛋白酶的作用，其分解产物羟脯氨酸从尿中排出，测定尿羟脯氨酸的含量，可反应胶原降解的情况。通过测定组织及尿中羟脯氨酸的含量，一方面可以判断纤维化程度，同时可以筛选预防与治疗的药物。

• 试剂一应用液：
  临用时取粉剂一瓶，先加甲液10mL充分溶解（从瓶口向内看，完全溶解完）。然后再加乙液20mL充分混匀。配好后的试剂2～8℃保存3个月。
  
• 试剂三应用液：
  临用时将粉剂一支加到60mL溶剂中充分溶解，配好后2～8℃避光保存1个月有效。
  
• 消化液应用液：
  临用前将粉剂倒入溶剂中，并用溶剂将粉剂瓶洗干净，现用现配。
  
• 标准贮备液：
  测试前将一支标准品用双蒸水溶解后定容至50mL，配成100μg/ml的标准贮备液。
  
• 5μg/ml标准应用液：
  取100μg/ml的标准贮备液用双蒸水20倍稀释后，配成5μg/ml的标准应用液，现用现配。

• 消化
  
  • 按下表加入各成分配制消化反应体系
    

    成分	空白管	标准管	测定管
    双蒸水	250μL
    5μg/ml标准应用液		250μL
    待测样本			250μL
    消化液应用液	50μL	50μL	50μL

    
    
  • 混匀，37℃水浴3小时。
• 羟脯氨酸测定
  
  • 向各反应管加入试剂一应用液0.5mL，混匀，室温静置10分钟。
    
  • 向各反应管加入试剂二0.5mL，混匀，室温静置5分钟。
    
  • 向各反应管加入试剂三应用液1mL，混匀，60℃水浴15分钟，
    
  • 流水冷却后，3500转/分离心10分钟，
    
  • 取上清，在550nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度。
  
  注：若您的样本中所含羟脯氨酸过低，可增加样本取样量或匀浆浓度。
  
• 计算公式
  
  • 血清(浆)、细胞上清等液体样本计算公式：
    

    羟脯氨酸含量 (μg/mL)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (5μg/mL)	×	样本测试前 稀释倍数
    		标准OD－值空白OD值

    
    
  • 组织样本计算公式：
    

    羟脯氨酸含量 (μg/克组织)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (5μg/mL)	÷	样品称重(g)
    		标准OD值－空白OD值				所加匀浆介质(mL)