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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（简称NAG）广泛存在于各种组织器官、体液、红细胞、白细胞及血小板中，是溶酶体中的一种酸性水解酶。底物在NAG作用下水解，释放出游离的对硝基酚。加入碱性溶液停止反应，并使对硝基酚显色。在400nm处测吸光度，可计算酶活力单位。

NAG为溶酶体中一种重要的酶，可作为肾损伤一个极为灵敏的指标，由休克引起急生肾功能衰竭的机体尿液中极度增高，最高可达正常情况下的1200倍。急性肾小球肾炎、肾病综合症，毒物或药物引起的肾毒性反应均可使NAG增加。肾移植后，NAG的测定可用来判断有无排斥反应。

• 操作简便：全程约20分钟，可测50例左右样本。
  
• 稳定性好：试剂盒2～8℃至少存放6个月。
  
• 再现性好：批内CV=4.6%，批间CV=7.19%。
  
• 回收试验：X =98%。
  
• 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
  
• 测试面广：可测动物血清(浆)、组织、尿液以及各种水产等，效果均佳。

• 分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为400nm）
  
• 恒温水浴箱或气浴箱（孵育温度为37℃）
  
• 漩涡混匀器
  
• 微量移液器

• 试剂四天冷会有结晶析出，测试前置于37℃水浴直至透亮。
  
• 用分光光度计测定时吸光度至0.6或酶活力至60单位呈线性，超出此范围请将样本用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数即可。
  
• 尿酶浓度随尿流率而变动，因此尿酶测定要求留取24小时尿；但因留24小时尿不方便，也不准确，故用“每单位/肌酐”比值计算酶排出率，效果较好。

• 按下表加入各成分配置反应体系。
  

  成分	空白管	标准管	测定管	对照管
  双蒸水	100μL
  0.6mmol/L标准应用液		100μL
  样品			100μL	100μL
  试剂一	500μL	500μL
  底物缓冲液			500μL

  
  
• 混匀，37℃准确反应15分钟。
  
• 按下表继续加入相应成分。
  

  成分	空白管	标准管	测定管	对照管
  试剂三	2mL	2mL	2mL	2mL
  底物缓冲液				500μL
  试剂四	50μL	50μL	50μL	50μL

  
  
• 混匀，在400nm处，1cm光径，双蒸水调零测各管吸光度值A。

• 单位定义：每升样品与底物在37℃作用1分钟，水解产生1μmol对硝基酚为1个酶活力单位。
  
• 计算公式：
  

  NAG活力 (U/L)	＝	A测定－A对照	×C标准÷T×1000
  		A标准－A空白

  
  C_标准：标准液浓度，0.6mmol/L；
  T：反应时间，15分钟。
  
• 计算举例：
  取血清0.1mL按步骤操作检测，测得空白管吸光度为为0.003，标准管为0.436，对照管为0.148，测定管为0.432，则计算如下：
  

  NAG活力 (U/L)	＝	0.432－0.148	×0.6÷15×1000＝26.236U/L
  		0.436－0.003

• 样本前处理
  准确称取样本的重量，按重量(g):体积(mL)＝1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清再用生理盐水稀释成1%的匀浆液待测。
  注：该匀浆浓度仅为参考，客户测定时可以根据这一浓度自行摸索样本的实际所需浓度。
  
• 操作表
  

  	空白管	标准管	测定管	对照管
  双蒸水	20μL
  3mmol/L标准液		20μL
  样品			20μL	20μL
  试剂一	500μL	500μL
  底物缓冲液			500μL
  混匀，37℃准确反应15分钟。
  试剂三	2mL	2mL	2mL	2mL
  底物缓冲液				500μL
  试剂四	50μL	50μL	50μL	50μL
  混匀，在400nm处，1cm光径，双蒸水调零测各管吸光度值A。

  
  
• 单位定义：每克组织蛋白与底物在37℃作用1分钟，水解产生1μmol对硝基酚为1个酶活力单位。
  
• 计算公式：
  

  组织NAG活力 (U/gprot)	＝	A测定－A对照	×C标准×	1000	÷Cpr
  		A标准－A空白		T

  
  C_标准：标准液浓度，3mmol/L
  T：反应时间，15分钟。
  Cpr：组织匀浆蛋白浓度，单位gprot/L(prot指的是蛋白)
  
• 计算举例：
  取1%大鼠肾脏皮质匀浆20μL按操作表进行检测，测得各管吸光度如下：空白管为0.003，标准管为0.392，对照管为0.065，测定管为0.519，用考马斯亮蓝法测得1%匀浆蛋白含量为1.241g/L，则计算如下：
  

  组织NAG活力 (U/gprot)	＝	0.519－0.065	×3×	1000	÷1.241＝188.09U/gprot
  		0.392－0.003		15