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本试剂盒可测各种动物红细胞、全血等样本中的糖化血红蛋白变化情况。


血红蛋白中具有酮胺键的糖化血红蛋白在酸性环境中加热，使己糖部分脱水，生成5-羟甲基糠醛（5-HMF）化合物，后者可与TBA反应呈黄色，然后进行比色定量。


糖化血红蛋白目前用作反映糖尿病患得到血糖在一段较长时间内（4-10）周的控制指标，血糖长期控制不良的，其糖化血红蛋白就会升高，因此糖化血红蛋白测定有助于控制，对糖尿病的周围血管和心血管并发症的研究有重要作用。

成分	用量	保存
试剂一：液体	20mL	室温保存6个月
试剂二：蛋白沉淀剂	20mL	室温保存6个月
试剂三：显色剂	10mL	室温避光保存3个月
试剂四：氰化高铁血红蛋白测试液	40mL	避光保存3个月

• 红细胞洗涤：
  取EDTA或肝素抗凝全血2～4mL置于带刻度离心管中，以500～1000转/分，离心5～10分钟，弃上清留沉淀的红细胞，然后用生理盐水按上述方法洗涤2～3次。（若来不及洗涤抗凝全血可放置48小时）
  
• 溶血液的制备：
  
  • 取压积红细胞1mL加冷双蒸水1.5mL，用手激烈震摇数分钟，或旋涡混匀器充分混匀1分钟制得溶血液，此溶血液-20℃保存，可放置70天。
    
  • 溶血液的血红蛋白（Hb）浓度测定方法如下：
    取溶血液10?l加试剂四2.5mL，混匀，室温放置10分钟，用分光光度计在540nm处，1cm光径水调零测各管吸光度；将所得吸光度×0.3677即为Hb的含量g/mL。
• 酸化：
  取玻璃试管，标明“0”即空白管，“U”即测定管，在“0”管中加入双蒸水2mL，“U”管中加入溶血液2mL，然后各管均加入试剂一 1mL酸化。加试剂一要缓慢，边滴边摇边加入。
  
• 水解：
  将上述试管加橡皮塞或塑料薄膜，（用针戳一小孔再用橡皮筋扎紧，将玻璃管口封住）。置沸水浴中或干燥箱100℃加热水解1小时。
  
• 显色：
  
  • 各管加试剂二（蛋白沉淀剂）1mL，（遇天冷时，水解液可能会凝固，可再加温使其溶解。）加试剂二要缓慢，边滴边摇边加入。加完后在旋涡混匀器上混匀，再3000～3500转/分，离心10分钟。
    
  • 取上清2mL，各加试剂三（显色剂）0.5mL，40℃水浴保温30分钟。
    
  • 冷却后，双蒸水调零、443nm、1cm光径，测各管的吸光度。

糖化血红蛋白的结果以每10克血红蛋白的吸光度表示：

每克血红蛋白吸光度	＝	测定OD值－空白OD值	×稀释倍数×10g
		2mL溶血液中血红蛋白克数
	＝	测定OD值－空白OD值	×10
		血红蛋白克数毫升溶血液

正常时每10克血红蛋白中的糖化血红蛋白的吸光度值范围为13.3～23.5。

• 本法精密度较好，平均CV值为4.2%。
  
• 溶血液如果未能及时测定，可贮存于-20℃的条件下达70天，不影响结果。
  
• 本法操作简便不需特殊仪器。
  
• 计算结果换算公式：
  IFCC-HbAlc（%）=每10克血红蛋白的吸光度×0.001+0.0154，
  IFCC- HbAlc（mmol/mol）=13×IFCC-HbAlc（%）×100-7.4，
  DCCT- HbAlc（%）=（IFCC- HbAlc（mmol/mol））÷10.929+2.15）÷100。

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