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硝酸还原酶测定试剂盒(比色法)图片
产品货号:
SNM095
中文名称:
硝酸还原酶测定试剂盒(比色法)
英文名称:
Nitrate reductase assay kit
产品规格:
50管/24样
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒可测各种新鲜植物等样本中硝酸还原酶(NR)活力。


NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3-+NADH+H+ →NO2-+NAD++H2O。产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰。可用分光光度法测定。


硝酸还原酶是植物氮素代谢中氮素同化的关键酶,它与作物吸收利用氮肥有关,对作物的产量和品质有影响。因而可以把硝酸还原酶的活力当作植物营养或农田施肥的指标之一,也可作为品种选育的重要指标。


组分规格保存条件
诱导剂储备液:液体50mL4℃
提取液:液体50mL4℃
试剂一:液体10mL-20℃
试剂二:液体8mL-20℃
试剂三:液体15mL4℃
试剂四:液体15mL4℃
试剂五:标准储备液1mL-20℃

保存:2~8℃,有效期6个月。


试剂三如果出现结晶析出,60℃~90℃水浴溶解后使用


可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、离心机、1cm光径比色皿、研钵、冰和蒸馏水。


  • 诱导剂应用液的配制:用时将诱导剂储备液稀释10倍,即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水,充分混匀。
  • 0.1μmol/mL的标准液的配制:用时将试剂五稀释100倍,即取0.1mL试剂五加9.9mL蒸馏水,充分混匀。



  • 组织的前处理:
    • 取适量诱导剂于烧杯中,将新鲜样标洗净,滤纸吸干,放入诱导剂应用液中(淹没即可),浸泡2h,取出样本,滤纸吸干后,-20℃冷冻30min,取出样本,滤纸吸干。(一般不要诱导处理,预测定结果没有活性则需要诱导处理)
    • 按照组织质量(g)∶提取液体积(mL)为1∶5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰水代测。
  • 细菌或培养细胞的前处理:
    先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个);提取液体积(mL)为500~1000∶1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min。取上清,置冰上代测。



  • 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
  • 测定步骤:
    成分(μL)测定管对照管标准管空白管
    样本100100
    0.1μmol/mL标准液100
    蒸馏水375475
    试剂一375375
    试剂二125125125125
    混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴30min。
    试剂三250250250250
    试剂四250250250250
    混匀,25℃温室静置20min,540nm光径比色。
    • 标准管和空白管只需测一次,每个样本需设一个测定管和一个对照管。



  • 按样本鲜重计算:
    单位定义:每小时每g鲜重样中催化产生1μmol NO2-的量为一个NR活力单位。
    NR活力
    (μmol/h/g鲜重)
    A测定-A对照×C标准×V1÷T
    A标准-A空白W×V1÷V2
    0.2×A测定-A对照÷W
    A标准-A空白

  • 按样本蛋白浓度计算:
    单位定义:每小时每mg组织蛋白催化产生1μmolNO2-的量为一个NR活力单位。
    NR活力
    (μmol/h/mgprot)
    A测定-A对照×C标准×V1÷T
    A标准-A空白Cpr×V1
    0.2×A测定-A对照÷Cpr
    A标准-A空白

C 标准:标准液浓度,0.1μmol/mL;
V1:加入样本体积:0.1mL;
V2:加入提取液体积,1mL;
T:反应时间,0.5h;
W:样本鲜重,g;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg prot/mL(prot指蛋白)
相关搜索:硝酸还原酶测定试剂盒(比色法)硝酸还原酶Nitrate reductase assay kit
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