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本试剂盒可测各种新鲜植物等样本中硝酸还原酶(NR)活力。


NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO₃^-＋NADH＋H⁺ →NO₂^-＋NAD⁺＋H₂O。产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰。可用分光光度法测定。


硝酸还原酶是植物氮素代谢中氮素同化的关键酶，它与作物吸收利用氮肥有关，对作物的产量和品质有影响。因而可以把硝酸还原酶的活力当作植物营养或农田施肥的指标之一，也可作为品种选育的重要指标。

组分	规格	保存条件
诱导剂储备液：液体	50mL	4℃
提取液：液体	50mL	4℃
试剂一：液体	10mL	-20℃
试剂二：液体	8mL	-20℃
试剂三：液体	15mL	4℃
试剂四：液体	15mL	4℃
试剂五：标准储备液	1mL	-20℃

保存：2～8℃，有效期6个月。


试剂三如果出现结晶析出，60℃～90℃水浴溶解后使用


可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、离心机、1cm光径比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

• 诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释10倍，即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水，充分混匀。
  
• 0.1μmol/mL的标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取0.1mL试剂五加9.9mL蒸馏水，充分混匀。

• 组织的前处理：
  
  • 取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜样标洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30min，取出样本，滤纸吸干。（一般不要诱导处理，预测定结果没有活性则需要诱导处理）
    
  • 按照组织质量(g)∶提取液体积(mL)为1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰水代测。
• 细菌或培养细胞的前处理：
  先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）；提取液体积(mL)为500～1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min。取上清，置冰上代测。

• 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
  
• 测定步骤：
  

  成分(μL)	测定管	对照管	标准管	空白管
  样本	100	100
  0.1μmol/mL标准液			100
  蒸馏水		375		475
  试剂一	375		375
  试剂二	125	125	125	125
  混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴30min。
  试剂三	250	250	250	250
  试剂四	250	250	250	250
  混匀，25℃温室静置20min，540nm光径比色。

  • 标准管和空白管只需测一次，每个样本需设一个测定管和一个对照管。

• 按样本鲜重计算：
  单位定义：每小时每g鲜重样中催化产生1μmol NO₂^-的量为一个NR活力单位。
  

  NR活力 (μmol/h/g鲜重)	＝	A测定－A对照		×C标准×	V1	÷T
  		A标准－A空白			W×V1÷V2
  	＝	0.2×	A测定－A对照	÷W
  			A标准－A空白

  
  
• 按样本蛋白浓度计算：
  单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmolNO₂^-的量为一个NR活力单位。
  

  NR活力 (μmol/h/mgprot)	＝	A测定－A对照		×C标准×	V1	÷T
  		A标准－A空白			Cpr×V1
  	＝	0.2×	A测定－A对照	÷Cpr
  			A标准－A空白

C _标准：标准液浓度，0.1μmol/mL；
V1：加入样本体积：0.1mL；
V2：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，0.5h；
W：样本鲜重，g；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg prot/mL(prot指蛋白)
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