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脂质过氧化物(LPO)在45℃条件下反应60分钟，一分子脂质过氧化物(LPO)和两分子的显色剂反应，产生一种稳定的生色团，在586nm有最大吸收峰。通过作标准曲线对照，或通过公式计算可得到检测样本中脂质过氧化物(LPO)的含量。

在动植生物体内，很多脂类含有不饱和脂肪酸，特别在生物膜的磷脂中，不饱和脂肪酸含量极高。不饱和脂肪酸化学性质很不稳定，很容易受到过氧化作用导致损伤，产生有细胞毒性的脂质过氧化物。近年来研究证明，脂质过氧化化合物能破坏人体细胞正常生理功能与某些疾病的病理过程，如肿瘤、化学中毒、感染、炎症、自身免疫疾病、动脉粥样硬化（AS）及心脑血管疾病，以及衰老等生理过程均有密切联系。

脂质过氧化被证实是一种细胞损伤机理，作为细胞和组织中氧化应激的一种指标。脂质过氧化物是不稳定的，其可分解形成一系列复杂的混合物，包括反应的羰基混合物。多不饱和的脂肪酸过氧化物分解产生丙二醛Malondialdehyde (MDA)和4-羟基烯烃类(HAE)。LPO、MDA和HAE的测量已经被用作脂质过氧化的一种指标。

• 试剂一应用液
  按基质储备液:基质稀释液＝3:1比例，现用现配。

• 酶标仪（比色测定波长为586nm）
  
• 恒温水浴箱或气浴箱（孵育温度为45℃）
  
• 台式离心机

• 在处理样本和试剂时不要吸烟，吃东西，喝饮料；
  
• 处理样本和试剂时戴上一次性手套，避免试剂解除到皮肤；
  
• 如果试剂一或试剂二不慎沾到皮肤、粘膜或眼睛里，用水充分清洗沾到试剂的部位。

• 样本前处理：
  血清（浆）样本：直接取样进行操作；
  组织样本：准确称取组织重量，按重量(g):体积(mL)＝1:9的比例加入生理盐水，冰水浴匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液检测。
  
• 操作表：
  取所需数量的1.5mL的带盖的离心管(最好用进口的)，编好号后，按下表进行操作。
  

  成分	空白管	标准管	测定管
  无水乙醇(μl)	200
  10μmol/L标准品(μl)		200
  样本(μl)			200
  试剂一应用液(ul)	650	650	650
  盖上盖充分混匀
  试剂二(μl)	150	150	150

  
  盖上盖混匀，45℃孵育60分钟，4000转/分，离心10分钟，取上清液200μL加入到96孔板中，586nm波长，测定各孔OD值
  
• 计算公式：
  
  • 血清(浆)样本：
    

    血清(浆)中LPO含量 (μmol/L)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (10μmol/L)
    		标准OD值－空白OD值

    
    
  • 组织样本
    

    组织中LPO含量 (μmol/gprot)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (10μmol/L)	÷	待测样本蛋白浓度 (gprot/L)
    		标准OD值－空白OD值

  
  
• 计算举例：
  
  
  • 血清中LPO的测定
    取200μL待测血清，按步骤操作，测得空白管OD值为0.0553，标准管OD值为0.2552，测定管OD值为0.1332，带入计算公式可得：
    
    

    血清(浆)中LPO含量 (μmol/L)	＝	测定OD值－空白OD值		×	标准品浓度 (10μmol/L)
    		标准OD值－空白OD值
    	＝	0.1332－0.0553	×10
    		0.2552－0.0553
    	＝	3.8969μmol/L

    
    
    
  • 组织中LPO的测定
    取10%小鼠肝匀浆200μL，按步骤操作，测得空白管OD值为0.0553，标准管OD值为0.2552，测定管OD值为0.3155，测得10%肝组织匀浆蛋白浓度为18.8137gprot/L，打入计算公式可得。
    
    

    组织中LPO含量 (μmol/gprot)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (10μmol/L)	÷	待测样本蛋白浓度 (gprot/L)
    		标准OD值－空白OD值
    	＝	0.3155－0.0553	×10÷18.8137
    		0.2552－0.0553
    	＝	0.6919μmol/gprot