产品货号:
SNM078
中文名称:
总蛋白定量测定试剂盒(BCA比色法)
英文名称:
The total protein assay kit
产品规格:
50管/48样|100管/96样
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒可测各种动物血清(浆)、组织、培养细胞、细胞培养上清及植物等样本中的蛋白含量。
BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂,混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫色的络合物,562nm处有最大吸收峰,依据吸光度与浓度成正比,通过测吸光度即可计算待测蛋白的浓度。
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BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂,混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫色的络合物,562nm处有最大吸收峰,依据吸光度与浓度成正比,通过测吸光度即可计算待测蛋白的浓度。
- 快速简单:比经典的Lowary法快4倍且更加方便;
- 灵敏度高:检测浓度下限达到20μg/mL,最小检测量达到0.5μg蛋白,在20~2000μg/mL浓度范围内有良好的线性关系。需要说明的是,由于灵敏度高,试剂配制所用器皿必须无蛋白污染。
- 本法测定蛋白浓度绝大部分化学物质的影响,包括不受离子型和非离子型去污剂影响。可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100及5%的Tween20、60、80。
- 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝蛋白定量。
- BCA蛋白质定量检测试剂在蛋白质的表达纯化,结构和功能的研究工作中,蛋白质的定量随处可见。BCA蛋白质检测试剂是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数甚小而深受专业人士的青睐,是目前国际上最流行的蛋白质定量检测方法。
- 鉴于试剂盒灵敏度高,试剂配制所用器皿必须无蛋白污染。
- 标准液浓度会有变化,请按标准液管壁标签上标示实际浓度计算。
检出限 | 20μg/mL |
批内CV | 2.06% |
批间CV | 4.72% |
回收率 | 98.5% |
线性范围 | 20~2000μg/mL |
组分 | 50管/48样 | 100管/96样 | 保存 | |
试剂一 | 粉剂 | 1支 | 2支 | 4℃密封保存6个月 |
稀释液 | 12.5mL | 2×12.5mL | ||
试剂二 | 硫酸铜 | 250μL | 2×250μL | |
试剂三 | 终止剂贮备液 | 10mL | 20mL | |
试剂四 | 蛋白标准液 | 200μL | 200μL | 4℃保存1个月,-20℃保存6个月 |
- 分光光度计(比色测定波长为562nm)
- 恒温水浴箱(孵育温度为37℃)
- 漩涡混匀器
- 微量移液器
- 试剂一应用液:取试剂一粉剂1支与试剂一稀释液1瓶混匀,溶解完全后4℃待用。
- 试剂二工作液:按试剂一应用液:试剂二=50:1的比例配制,混匀后待用,用多少配多少。
- 终止剂应用液:取终止剂贮备液用双蒸水5倍稀释后备用,4℃冷藏。
- 动物组织样本:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的匀浆介质(匀浆介质推荐使用100mM pH7.4的磷酸盐缓冲液或者生理盐水),冰水浴条件下机械匀浆,2500转/分,离心10分钟,取上清液再用匀浆介质按1:9稀释成1%的组织匀浆,或按1:19稀释成0.5%的组织匀浆,待测。 - 植物组织样本:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的匀浆介质(匀浆介质推荐使用100mM pH7.4的磷酸盐缓冲液或者生理盐水),冰水浴条件下机械匀浆,3500转/分,离心10分钟,取上清液再用匀浆介质按1:9稀释成1%的组织匀浆,或按1:19稀释成0.5%的组织匀浆,待测。 - 血清/血浆样本:
按血清/血浆:生理盐水=1:49的比例稀释(或1:99比例稀释),待测。 - 其他液体样本:按比例稀释,测定范围为20~2000μg/mL,不同的样本稀释度不一样,请在批量测试前先做1~2个样本的预实验。
- 按下表加入各成配置反应体系:
成分 空白管 标准管 测定管 双蒸水 20μL - - 标准液 - 20μL - 待测样本 - - 20μL 试剂二工作液 250μL 250μL 250μL - 漩涡混匀,37℃孵育30分钟。
- 向各管加入750μL终止剂应用液。
- 漩涡混匀,静置5分钟,562nm波长,0.5cm光径,蒸馏水调零,测定各管吸光值。
蛋白浓度 (μg/mL) | = | A测定-A空白 | × | 标准液浓度 (μg/mL) | ×样品测试前稀释倍数 |
A标准-A空白 |
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