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GCL是还原型谷胱甘肽（GSH）合成的限速酶，GSH对GCL有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和还原型和氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）比值有重要影响。

在ATP和Mg²⁺存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ谷氨酰半胱氨酸；同时ATP分解产生无机磷，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。

• 试剂二粉剂临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解；
  
• 试剂三粉剂临用前加3.5mL蒸馏水充分震荡溶解；
  
• 试剂五粉剂临用前加30mL蒸馏水充分震荡溶解，缓缓加入1.0mL浓硫酸，边加边搅拌。

• 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力。如果是匀浆液，避免反复冻融；
  
• 所有粉剂溶液配置完后，除特定说明，请在当日用完；
  
• 实验过程中请带手套，试剂三中含有强腐蚀性物质，注意不要溅到皮肤上或眼睛内；
  
• 吸光度测定请于水浴后10～40分钟内完成；
  
• 样品测定请先取1～2个样品做预试验，如发现吸光率太高，应先用试剂一（或生理盐水）稀释适当倍数，哺乳动物组织一般稀释3～5倍；
  
• 试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，注意吸取时不要讲黑色固体吸入，则其不会影响结果；
  
• 细胞中GCL活性测定时，细胞数量需在300万～500万之间，细胞中GCL的提取时可加入试剂一（或生理盐水）后研磨或超声处理，不能用细胞裂解液处理细胞。

• 组织样本：按照组织质量(g)∶试剂一(mL)＝1∶5～10的比例，建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一，进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
  
• 细菌、真菌样本：按照细胞数量(10⁴个)∶试剂一(mL)＝500～1000∶1的比例，建议500万细胞加入1mL试剂一，冰浴超声波破碎（功率300W，超声3s，间隔7秒，总时间3min）；在4℃下10000rpm离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 血清浆等液体样本：直接取样。

• 分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，用蒸馏水调零；
  
• 按下表加入各成分：
  

  成分(μL)	测定管	对照管
  待测样本	120	－
  试剂一	240	240
  试剂二	260	260
  试剂三	60	60

  
  
• 混匀，37℃准确水浴15分钟。
  
• 按下表加入各成分：
  

  成分(μL)	测定管	对照管
  试剂四	300	300
  待测样本	－	120

  
  
• 混匀，室温（25℃）下10000rpm离心10分钟，取上清500μL待测。
  
• 按下表加入各成分：
  

  成分(μL)	测定管	对照管
  上清	500	500
  试剂五	500	500

  
  
• 混匀后盖紧，45℃水浴10分钟。
  
• 冷却后，空白管调零（或蒸馏水调零），测定660nm处各管吸光度值，计算△A＝A_测定管－A_对照管。
  • 吸光度需在水浴完成后尽快测定完成。

• 按样本蛋白浓度计算：
  活性单位定义：在37℃，每毫克蛋白每分钟催化产生1μg无机磷的GCL酶活量为1U。
  

  GCL活性 (U/mgprot)	＝	ΔA÷0.1427×	V反总	÷T
  			Cpr×V样
  	＝	3.815×ΔA÷Cpr

  
  
• 按样本质量计算：
  活性单位定义：在37℃，每克样品每分钟催化产生1μg无机磷的GCL酶活量为1U。
  

  GCL活性 (U/g鲜重)	＝	ΔA÷0.1427×	V反总	÷T
  			W×V样÷V样总
  	＝	3.815×ΔA÷W

  
  
• 按细胞数量计算：
  活性单位定义：在37℃，每10⁴个细胞每分钟催化产生1μg无机磷的GCL酶活量为1U。
  

  GCL活性 (U/104cells)	＝	ΔA÷0.1427×	V反总	÷T
  			细胞数×V样÷V样总
  	＝	3.815×ΔA÷细胞数

  
  
• 按样本体积计算：
  

  GCL活性 (U/mL)	＝	ΔA÷0.1427×	V反总	÷T
  			V样
  	＝	3.815×ΔA

• 0.1427：回归方程系数；
  
• V_反总：反应体系总体（L），980μL=0.98×10^-3L；
  
• Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用BCA法或考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒；
  
• V_样：加入反应体系中上清液体积（mL），120μL=0.12mL；
  
• V_样总：加入提取液体积，1mL；
  
• T：催化反应时间（min），15min；
  
• W：样本质量，（g）；
  
• 细胞数量：10⁴个。