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细胞膜上的NADPH氧化酶被激活，将还原型辅酶Ⅱ（NADPH）转变为氧化型辅酶Ⅱ（NADP+），氧分子则获得电子形成超氧阴离子O2-，由O2-又可生成H2O2和OH－。其超氧阴离子产物具有杀死微生物的功能。NADPH氧化酶异常将导致慢性肉芽肿病（Chronic Granulomatous Disease；CGD）。基于底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），在特异性抑制剂联苯基三价碘（diphenyleneiodonium；DPI）的存在下，受到NADPH氧化酶的催化作用，转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+），产生吸光峰值的变化，通过分光光度仪（340nm波长）检测，来测定NADPH氧化酶的特异活性。其反应方式为：


试剂盒组成：

组分	规格
试剂A：清理液	30mL
试剂B：裂解液	5mL
试剂C：缓冲液	20mL
试剂D：反应液	2.5mL
试剂E：阴性液	2mL
试剂F：底物液	500μL
试剂G：专性液	200μL

保存条件：试剂A和试剂E在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；试剂D和试剂F，避免光照，有效保证6月

用户自备：
● 15mL锥形离心管：用于样品操作的容器
● 1.5mL离心管：用于样品操作和保存的容器
● 4℃（微型）台式离心机：用于样品处理
● DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
●恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育
●比色皿：用于光度测定的容器
●分光光度仪：用于光度分析

使用方法：
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；反应液（Reagent D）和底物液（Reagent F）注意避光。然后进行下列操作。
1、样本提取详见试剂盒内说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用本所的考马斯亮蓝法总蛋白定量测试盒（SNM152）或者BCA法总蛋白定量测试盒(SNM078、SNM079)进行蛋白浓度的测定。

2、测定准备
1．从-70℃取出待测样品（例如组织裂解悬液样品等），置于冰槽里。
2．设定好分光光度计：30℃、波长为340nm，间隔30秒，读数5次（共2分钟），置零。
3．缓冲液室温预热。
3、操作表

	阴性对照孔	样本总活性	样本非特异活性
试剂C(μL)	780	780	780
试剂D(μL)	100	100	100
试剂F(μL)	20	20	20
轻摇混匀，30℃孵育3min
试剂E(μL)	100	-	-
待测样本(μL)	-	100	100
试剂G(μL)	-	-	20
充分混匀，波长340nm，测定初始吸光度值A0；转入30℃孵育箱（或者在30℃水浴箱）中温浴2min，即刻放入分光光度计测定吸光度值A2

单位定义及活性计算公式：
NADPH氧化酶活性单位浓度定义：在30℃室温下，pH 7.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）氧化1微摩尔的还原型辅酶Ⅱ（NADPH）
相关搜索：NADPH氧化酶活性测试盒(比色法)，NADPH oxidase assay kit