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ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应ATP含量。

• 试剂一：临用前向试剂一粉剂中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
  
• 试剂三：临用前向试剂三粉剂中加入1.2mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

• ATP提取：
  
  • 组织中ATP的提取：称取约0.1g样本，加入1mL蒸馏水，冰浴匀浆，100℃加热提取5min，8000g 4℃离心15min，取上清液待测。
    
  • 细胞或细菌中ATP的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量(10⁴个)∶蒸馏水(mL)为500~1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，超声2s，停1s），8000g 4℃离心15min；取上清液待测。
    
  • 血清（浆）中ATP的提取：取约0.1mL血清（浆），加入1mL蒸馏水，冰浴匀浆，100℃加热提取5min，8000g 4℃离心15min，取上清液待测。
• 测定步骤：
  
  • 酶标仪或分光光度计预热30min以上，调节波长到700nm，蒸馏水调零。
    
  • 显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.2mL），按试剂四∶试剂五=1∶5的比例配制。用多少配多少。
    
  • 样本测定：
    

    成分(μL)	测定管	标准管	空白管
    样本	10
    标准液		10	10
    试剂一	20	20
    试剂二	10	10	10
    试剂三	10	10
    蒸馏水			30
    充分混匀，37℃准确水浴30min
    显色剂	200	200	200
    37℃水浴20min后，700nm下测定各管吸光值

    • 空白管和标准管通常只需要各做一个。

• 血清（浆）中ATP含量计算
  

  ATP含量 (μmol/mL)	=	C标准×	A测定－A空白	×V1÷(V3×V1÷V2)
  			A标准－A空白
  	=	5×	A测定－A空白
  			A标准－A空白

  
  
• 组织、细菌或细胞中ATP含量计算
  
  • 按蛋白浓度计算
    

    ATP含量 (μmol/mg prot)	=	C标准×	A测定－A空白	×V1÷(V1÷Cpr)
    			A标准－A空白
    	=	0.5×	A测定－A空白	÷Cpr
    			A标准－A空白

    • 蛋白质含量需要另外测定。
  • 按样本鲜重计算
    

    ATP含量 （μmol/g鲜重)	=	C标准×	A测定－A空白	×V1÷(W×V1÷V2)
    			A标准－A空白
    	=	0.5×	A测定－A空白	÷W
    			A标准－A空白

    
    
  • 按细菌或细胞密度计算
    

    ATP含量 (μmol/104 cell)	=	C标准×	A测定－A空白	V1÷(500×V1÷V2)
    			A标准－A空白
    	=	0.001×	A测定－A空白
    			A标准－A空白

• 最低检测限为10nmol/mL或10nmol/g鲜重或0.1nmol/mg prot。